旱莲草总黄酮的提取及其体外抗氧化活性研究

《旱莲草总黄酮的提取及其体外抗氧化活性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、旱莲草总黄酮的提取及其体外抗氧化活性研究作者：王雪梅张建胜戴云高云涛【摘要】　　目的研究旱莲草总黄酮的提取及其抗氧化活性。方法利用Fentaon反应产生羟自由基·OH，光照核黄素产生超氧阴离子自由基O-2·，采用分光光度法研究旱莲草体外清除活性氧自由基的作用，用硫代巴比妥酸（TBA）分光光度法研究其对·OH诱发卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤的抑制作用。结果旱莲草总黄酮得率为3.96%，对·OH、O-2·的半清除率IC50为0.015mg·ml-1，0.08mg·ml-1;对脂质过氧化DNA氧化损伤的半抑制率为0.02mg·ml-1，2.0μg·ml-1

2、。结论旱莲草总黄酮能有效清除活性氧自由基，对卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤有显著抑制作用。　【关键词】旱莲草；总黄酮；抗氧化　　Abstract：ObjectiveTostudytheextractionofflavonefromEcliptaalbaanditsantioxidationfunction.MethodsScavengingeffectsofEcliptaalbaonactiveoxygenspecies·OHandO·-2generatedbyFentonreactionandriboflavinephotosensitization

3、eansofspectrophotometry.TheinhibitoryeffectsofEcliptaalbaonthelecithinlipidperoxidationanddamageofDNAchaininducedbyhydroxylradicaletry.ResultsTotalflavonoidsinEcliptaalbai-clearancerateof·OHandO·-2g·ml-1and0.08mg·ml-1;thesemi-inhibitionrateofLecithinlipidperoxidationandoxidationd

4、amageofDNAg·ml-1and2.0μg·ml-1.ConclusionEcliptaalbacanscavengeactiveoxygenefficiently.ItcanalsosignificantlyinhibitlipidperoxidationanddamageofDNAbyhydroxylradical.　　KeyBase公司），番红花红（SafranineT），蛋氨酸，鲱鱼精DNA（购至sigma公司），2-硫代巴比妥酸（TBA），三氯乙酸（TCA），无水乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，石油醚，所用试剂均为分析纯，实验用水为二次

5、蒸馏水。　　9200型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司），数显恒温水浴锅，低温超速离心机，光照箱（自制，35cm×30cm×25cm，光源为纯稀土节能灯，灯功率45in，过滤，滤渣再用20倍量的85%的乙醇超声浸提45min，过滤后合并两次滤液，用石油醚萃取两次，取下层液于旋转蒸发仪浓缩至干，称重。将旱莲草总黄酮初提物用甲醇溶解并定溶至100ml备用。　　2.2总黄酮含量的测定准确称取芦丁标准品0.0132g，用70%的乙醇溶解转移至50ml的容量瓶(浓度为0.264mg·ml-1)，精密量取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0

6、，8.0ml置于25ml比色管中,用30%乙醇溶液补充至10ml，加入5%亚硝酸钠溶液0.7ml,摇匀,放置5min后,加入10%硝酸铝溶液0.7ml，摇匀,5min后再加入1mol·L-1氢氧化钠溶液5ml，摇匀，用30%乙醇溶液稀释至刻度,10min后在510nm处测定吸光度,以蒸馏水为空白参比。以芦丁浓度对吸光度作标准曲线,并计算回归方程。吸取2ml旱莲草提取液于25ml比色管中，按上述标准曲线的操作方法测定吸光度Y值,并通过标准曲线的回归方程换算成浓度X(mg·ml-1)。　　2.3旱莲草总黄酮清除超氧阴离子自由基活性测定采用光照核黄素［7］的方

7、法用0.05mol·L-1pH=7.4的PBS缓冲液为溶剂，配制1.67×10-5mol·L-1核黄素，0.01mol·L-1蛋氨酸，4.6×10-5mol·L-1氯化硝基四氮唑兰(NBT)。分别取上述3种溶液各2.0ml，加入不同浓度的总黄酮提取液（样品）溶液1.0ml，空白管以1.0ml缓冲液代替样品溶液。置于光照箱中光照30min，取出后以缓冲溶液为参比于560nm处测定溶液的吸光度。清除率按下式计算。A0为空白管的吸光度。A样为样品管的吸光度。　　清除率（%）=A0-A样A0×100%　　2.4旱莲草总黄酮清除羟自由基活性测定采用亚铁离子催化过氧

8、化氢产生羟自由基（Fenton反应），该反应产生的羟自由基可使番红花红褪色［8］