最新基因诊断血红蛋白病-遗传病的基因诊断教学讲义ppt课件.ppt

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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉

2、快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅基因诊断血红蛋白病-遗传病的基因诊断基因诊断（genediagnosis）基因诊断，是用分子生物学的理论和技术，从DNA/RNA水平检测基

3、因的存在、分析基因的结构变异和表达状况,从而对人体状态与疾病作出诊断。（1）应用基因探针或PCR进行缺失型基因监测（2）造成特异限制酶切位点改变的突变基因的监测（3）突变位点特异性监测——ASO探针斑点杂交当致病基因虽然已知但其异常尚属未知时，或致病基因本身尚属未知时，也可以通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致病基因的染色体。间接诊断提取DNA→限制性内切酶消化DNA以产生特定长度的片段→凝胶电泳分离→变性处理→DNA转印到膜上并使其牢固结合→将标记的探针与膜上DNA片段杂交，分析杂交信号。用于DNA的检测，能检测出特异的DNA片段，可

4、用于基因的限制性内切酶图谱分析、基因突变分析等。用于DNA的定性或定量检测。1.Southern印迹杂交部分α地中海贫血和三分之二以上的杜氏及贝氏进行性肌营养不良（DMD及BMD）是整个基因或基因片段的缺失造成的。应用基因探针（基因组DNA或cDNA探针）进行Southern印迹杂交，如果某些杂交片段消失或片段长度改变（不是由于限制酶识别位点的改变造成的RFLP），即可判定受检者有基因缺失。（应用举例）2.Northern印迹杂交用于RNA的检测，能对组织细胞中总RNA或mRNA进行定性和定量分析。Northernblot的步骤：RNA经变性凝胶电泳后，将其转

5、移到固相支持物上，以便用杂交反应检测特定的mRNA分子的含量与大小。其优点是简单、迅速；可以在同一张膜上同时进行多个样品的检测；对于核酸粗提样品的检测效果也较好。但其缺点是不能确定所测基因的分子量。斑点杂交(dotblothybridization)2.PCRPCR技术是一种在体外的DNA合成技术，它能在短时间内将靶DNA扩增百万倍，而且操用简便，省时，准确性也高，它不仅能直检突变基因，而且可与其它技术结合，使其诊断的准确性几达100%.因而它已成为目前遗传病诊断的产前诊断的主要手段PCR原理PCR技术的基本过程PCR相关技术用于遗传病的基因诊断（1）PCR-

6、RFLP分析当点突变影响到限制内性切酶切点时，可用PCR-RFLP进行分析，即将扩增产物用适当的内切酶切割，然后据电泳图谱复制判断有无内切酶切点的改变，它比传统的检测法快速简便，且不受同位素的危害.（2）PCR-ASO分析绝大多数“点”突变不改变酶的识别位点，但经DNA序列分析明确基因的突变的细节之后，可人工合成针对突变位点的特异寡核苷酸（allelespecificoligonucleotide,ASO）探针，进行突变基因的直接监测ASO探针的长度一般为19个碱基，分别与被测定的突变所在区域的正常和异常DNA序列互补。在一定的杂交和洗脱条件下，只要有一个碱基

7、不匹配，就不能形成稳定的杂交链，正常探针只能与正常基因序列杂交而不能与突变基因的序列杂交，反之亦然。1983年Conner等首先应用ASO探针进行镰形细胞贫血的基因监测，现在已广泛应用于β地中海贫血及其他遗传性疾病的基因诊断。ASO（Allelespecificoligonucleotide）探针：等位基因特异性寡核苷酸探针，指针对各种正常和突变靶序列设计的特异性寡核苷酸探针。目的基因的扩增将合成的各种突变和相应正常的寡核苷酸探针成对点在尼龙膜上分别与标记的ASO探针进行杂交放射自显影分析方法：这种方法的优点是灵敏准确，可对大量样品进行筛查和诊断。缺点是效率低

8、，工作量大。探针点杂交（3）荧光定量P