资源描述：
《耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌分子特征及替加环素联合头孢哌酮舒巴坦对其抗菌作用的研究.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌分子特征及替加环素联合头孢哌酮/舒巴坦对其抗菌作用的研究目的：分析耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistantAcinetobacter6aumannii,CRAB)的分子特征并评价替加环素联合头孢哌酮/舒巴坦对CRAB的体外、体内及细胞内活性。方法：(1)应用RT-PCR检测我院临床分离的非重复87株CRAB携带blaTEM,blaGES,blaSHV,blaKPC,blnCTX-M-1,blaVIM-1,blaVIM-2,blaIMP-1,blaIMP-2,blanSIM-1,blaNDM-1,blaOXA-23-like,blaO
2、XA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like等15个碳青霉烯酶耐药基因情况并测序。(2)应用微量肉汤稀释法测定联合抑菌指数(FICI),应用时间—杀菌曲线评价替加环素、头孢哌酮/舒巴坦及联合用药的体外效果。(3)C57BL/6小鼠腹腔内注射最低致死剂量的CRAB建立腹膜炎/脓毒症小鼠模型,分析给药4h和18h小鼠血、肺、肝、脾、肾各脏器菌落数并观察病理。(4)建立细胞内感染鲍曼不动杆菌模型：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7与CRAB孵育4h,庆大霉素清除细胞外细菌,细胞培养24h。电镜观察细胞吞噬细菌及细胞内细菌的状态。评价各抗菌药物的细胞内外抑
3、菌浓度(bacteriostaticconcentrations,Cs)和最大相对效应(maximalrelativeefficacies,Emax),并绘制量效曲线和时间—杀菌曲线。结果：(1)87株CRAB共携带4种碳青霉烯酶基因：blaOXA-51-like(97.7%),blaOXA-23-like(95.4%),blaTEM(85.1%)和blaOXA-58-like(2.3%)。耐药模式最多为：blaTEM+blaOXA-23+blaOXA-51-like(83.9%).(2)单药时：替加环素MIC<Cmax的CRAB比例为57.5%,头孢哌酮/舒巴坦敏感率为12
4、.6%。两药联合时,替加环素MIC<Cmax的比例为96.6%,头孢哌酮/舒巴坦的敏感率为44.8%。联合抑菌指数(FICI)≤0.5的比例为25.3%。时间—杀菌曲线：1/2×MIC和1×MIC的联合用药在AB-8,AB-14,AB-44菌株呈协同作用,并能清除肉汤中的细菌,但替加环素联合等剂量的舒巴坦却在24h后出现了细菌的再生长。(3)腹膜炎/脓毒症小鼠死亡率：替加环素单药和联合用药较模型组(0%VS100%,P<0.05)和头孢哌酮/舒巴坦单药组(0%VS50%,P<0.05)明显下降。肺、肝、脾、肾等组织病理炎症明显减轻。给药4h：替加环素与联合用药组各
5、脏器的菌落数均较模型组及头孢哌酮/舒巴坦组减少(替加环素：血5.64±0.16log10CFU/mL,肺5.73±0.091og10CFU/g,肝6.34±0.17log10CFU/g,脾7.11±0.17log10CFU/g,肾5.98±0.13log10CFU/g;联合用药组：血5.13±0.20log10CFU/mL,肺5.09±0.06log10CFU/g,肝5.81±0.16log10CFU/g,脾7.17±0.09log10CFU/g,肾5.71±0.18log10CFU/g;模型组：血7.18±0.27log10CFU/mL,肺7.19±0.31log10CFU/g,
6、肝8.11±0.21log10CFU/g,脾8.16±0.26log10CFU/g,肾7.67±0.31log10CFU/g;头孢哌酮/舒巴坦组：血6.27±0.26log10CFU/mL,肺6.21±0.37log10CFU/g,肝7.01±0.17log10CFU/g,脾7.92±0.15log10CFU/g,肾6.87±0.31logl0CFU/g)(P<0.05);联合用药与替加环素单药相比,肺、肝菌落数明显下降(-0.63±0.11log10CFU/g,-0.53±0.231og10CFU/g)(P<0.05)替加环素联合头孢哌酮/舒巴坦与替加环素联合等剂量的
7、舒巴坦比较,作用4h各脏器的菌落数差异无统计学意义,但作用18h前者肝脏的菌落数明显下降(4.40±0.17log10CFU/gVS4.86±0.121og10CFU/g,P<0.05).(4)透射电镜观察到细菌在RAW264.7细胞液泡中复制。头孢哌酮/舒巴坦作用6h时并不能抑制细胞内细菌的生长,但是延长至24h,可抑制细胞内细菌生长；而替加环素作用6h即能抑制细胞内细菌生长；联合用药细胞内的时间—杀菌曲线与替加环素单药基本重合。头孢哌酮/舒巴
