耐头孢哌酮-舒巴坦鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查

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1、耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查【摘要】目的调查重庆某三甲医院2004年11月至2005年9月显著增多的耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌之间的同源性，了解是否有该耐药株暴发流行。方法用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对28株具有相同耐药模式的耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆。结果28株鲍曼不动杆菌PFGE图谱分为A(A1、A2、A3)、B(B1、B2)、C、D、E五型，其中主要流行型A1亚型11株，流行型B1亚型9株，剩余8株中A2亚型2株，A3亚型2株，B2亚型1

2、株，C型2株，E型1株。A1亚型和B1亚型来源于呼吸科，并在外科病区的胸外科、脑外科、肝胆外科已存在9个月左右；A2亚型、A3亚型、B2亚型和C型2株于2005年6月开始出现于胸外科和肝胆外科。结论2004年11月至2005年9月该院出现了由2个克隆株引起耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的暴发流行，结合临床资料和科室地理位置分析，医务人员的手污染可能是引起本次暴发感染的重要感染源和感染途径。【关键词】不动杆菌属；头孢哌酮/舒巴坦；耐药性；脉冲场凝胶电泳ABSTRACTObjectiveTolearnanout

3、breakofAciobacerbaumanniibyinvestigatingthehomogenEityoftheunusuallyincreasingcefoperazone/sulbactam-resistantAciobacerbaumanniiisolatesfromNovember2004toSeptember2005inahospitalinChongqing.MethodsThepulse-fieldgelelectrophoresis(PFGE)anniieresistancepatte

4、rnanddeterminingthesameclone.ResultsTedtypeA(A1,A2andA3),B(B1andB2),C,typeDandE.Thererespira-torydepartmentittedtodeparmentsofcerebralsurgery,chestsurgeryandhepatobiliarysurgeryduring9months,entsofchestsurgeryandhepatobiliarysurgerysinceJune2005.Conclusion

5、sAnoutbreakofcefoperazone/sulbactam-resistantAciobacterbaumanniiinfectionoccurredinourhospitalfromNovember2004toSeptember2005,ajorclones,typeAandtypeB.binediclocation,theinvestigationshoinatedhandsofstaffsmaybetheinfectiveoriginandtherouteoftransmission.KE

6、Yerieux，法国)及常规生化方法。(2)仪器与试剂CHEF-MapperXA型脉冲电泳仪购于美国Bio-Rad公司；蛋白酶K为GIBCOBRL公司产品；ApaI为Promega产品；所有药敏纸片购自BD公司。(3)临床调查回顾性分析了28例患者的病例资料，了解其基本情况、所患疾病、诊疗经过、细菌学检查等。1.2方法脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作过程参照Seifert报道方法［2］，略加改进。①细菌DNA原位纯化：将细菌与等体积2%低熔点琼脂糖混匀后注模，成型凝胶块分别经蛋白酶K溶液裂解、PMSF溶液处理

7、后，置于4℃过夜；②限制性内切酶原位消化：将原位纯化的凝胶块切成一定大小薄片，加入含50IUApaI的孵育缓冲液37℃酶切过夜；③上样：采用梳齿上样法，将消化好的样本凝胶块和λ条带标记物(CHEFDNAsizestandard，Bio-Rad)凝胶块上样于1%电泳琼脂糖凝胶；④电泳：使用CHEFMapperXA电泳系统(Bio-Rad)。电泳条件：6v/cm，22h，脉冲时间5～20s，角度120°；⑤染色及图像采集：凝胶于0.25mg/ml溴化乙锭中染色漂洗后，采用凝胶成像系统(Bio-Rad)采集凝胶D

8、NA指纹图像；⑥菌株DNA同源性判定标准：参照Tenover等［3］的肉眼判定标准：a)无法区分：0条带不同；b)紧密相关：2～3条带不同；c)有可能有关：4～6条带不同；d)不同：≥7条带不同。带型差异≤3条带的菌株被认为基因组高度同源，属同一克隆，在流行病学上密切相关。2结果2.1临床资料调查结果28株耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌来源于三个不同的病区：外科病区16株，传染呼吸病区10株，内科病区2株；其中来