耐头孢哌酮-舒巴坦鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查论文

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1、耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查论文【摘要】目的调查重庆某三甲医院2004年11月至2005年9月显著增多的耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌之间的同源性，了解是否有该耐药株暴发流行。方法用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对28株具有相同耐药模式的耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆。结果28株鲍曼不动杆菌PFGE图谱分为A(A1、A2、A3)、B(B1、B2)、C、D、E五型，其中主要流行型A1亚型11株，流行型B1亚型9株，剩余8株中A2亚型2株，A3亚型2株，B2亚型1株.f

2、reelanniibyinvestigatingthehomogeneityoftheunusuallyincreasingcefoperazone/sulbactam-resistantAciobacerbaumanniiisolatesfromNovember2004toSeptember2005inahospitalinChongqing.MethodsThepulse-fieldgelelectrophoresis(PFGE)anniieresistancepatternanddeterminingthesa

3、meclone.ResultsTedtypeA(A1,A2andA3),B(B1andB2),C,typeDandE.Thererespira-torydepartmentittedtodeparmentsofcerebralsurgery,chestsurgeryandhepatobiliarysurgeryduring9months,entsofchestsurgeryandhepatobiliarysurgerysinceJune2005.ConclusionsAnoutbreakofcefoperazone/

4、sulbactam-resistantAciobacterbaumanniiinfectionoccurredinourhospitalfromNovember2004toSeptember2005,ajorclones,typeAandtypeB.binediclocation,theinvestigationshoinatedhandsofstaffsmaybetheinfectiveoriginandtherouteoftransmission.KEYerieux，法国)及常规生化方法。(2)仪器与试剂CHEF

5、-MapperXA型脉冲电泳仪购于美国Bio-Rad公司；蛋白酶K为GIBCOBRL公司产品；ApaI为Promega产品；所有药敏纸片购自BD公司。(3)临床调查回顾性分析了28例患者的病例资料，了解其基本情况、所患疾病、诊疗经过、细菌学检查等。1.2方法脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作过程参照Seifert报道方法［2］，略加改进。①细菌DNA原位纯化：将细菌与等体积2%低熔点琼脂糖混匀后注模，成型凝胶块分别经蛋白酶K溶液裂解、PMSF溶液处理后，置于4℃过夜；②限制性内切酶原位消化：将原位纯化的凝胶块切成一定大小

6、薄片，加入含50IUApaI的孵育缓冲液37℃酶切过夜；③上样：采用梳齿上样法，将消化好的样本凝胶块和λ条带标记物(CHEFDNAsizestandard，Bio-Rad)凝胶块上样于1%电泳琼脂糖凝胶；④电泳：使用CHEFMapperXA电泳系统(Bio-Rad)。电泳条件：6v/cm，22h，脉冲时间5～20s，角度120°；⑤染色及图像采集：凝胶于0.25mg/ml溴化乙锭中染色漂洗后，采用凝胶成像系统(Bio-Rad)采集凝胶DNA指纹图像；⑥菌株DNA同源性判定标准：参照Tenover等［3］的肉眼判定标准

7、：a)无法区分：0条带不同；b)紧密相关：2～3条带不同；c)有可能有关：4～6条带不同；d)不同：≥7条带不同。带型差异≤3条带的菌株被认为基因组高度同源，属同一克隆，在流行病学上密切相关。2结果2.1临床资料调查结果28株耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌来源于三个不同的病区：外科病区16株，传染呼吸病区10株，内科病区2株；其中来自监护病房(ICU)13株，来自普通病房15株；23株来源于痰标本(含1份气管抽吸物)，2株来源于尿标本，2株来源于脓液，1株来源于伤口分泌物。所有患者都存在以下一种以上严重的基础疾病：呼

8、吸衰竭、慢性阻塞性肺气肿、肺癌、脑出血、脑挫裂伤、肝移植术后和胸腹腔大手术等。所有患者在药敏结果出来之前使用过头孢哌酮/舒巴坦。2.2PFGE结果ApaI可将鲍曼不动杆菌DNA切成约15条以上条带。阴性对照301号有7条以上不同条带，故可断定与其余各株无关(图略)。28株鲍曼不动杆菌分为A(A1、A2、A3)型15株、B(B1、B2)型9株、C