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1、遗传学和免疫表型分析在急性粒单核细胞白血病临床诊断中的意义【摘要】目的探讨染色体G显带、荧光原位杂交和流式细胞术在急性粒单核细胞白血病临床诊断、鉴别诊断和预后中的意义。方法运用染色体G显带和流式细胞术，对15例骨髓细胞形态学拟诊为急性髓系白血病M4型(AMLM4)的患者进行核型分析和免疫分型，并用间期荧光原位杂交技术(interphasalfluorescenceinsituhybridization,IFISH)对其中6例患者进行检测。结果染色体G显带核型分析显示正常核型6例，伴有inv(16)(pl3;q22)异常2例，伴有del
2、(16)(q22)、X,5q,t(8;21)(q22;q22)、t(9;22)(q34;ql1)、t(ll;17)和t(ll;?)异常各1例，另有2例无分裂相可供分析。IFISH对3例患者进行CBF3基因更排检测，2例阳性，1例阴性：对这例阴性患者进一步检测AML1/ETO融合基因，结果阳性；3例患者检测了MLL基因重排，2例阳性，1例阴性但伴有t(9；22)异常，BCR/ABL融合基因阳性。免疫分型提示14例患者有髓系和单核系分化抗原的共同表达，1例仅有髓系表达。结论联合运用染色体G显带、荧光原位杂交技术和流式细胞术，对于急性粒单核
3、细胞白血病诊断、鉴别诊断和预后，具有重要的临床意义。【关键词】急性粒单核细胞性白血病染色体G显带间期荧光原位杂交流式细胞术急性粒单核细胞白血病被FAB分型定义为急性髓性白血病M4型(AMLM4),根据骨髓原幼粒细胞和原幼单细胞所占比例不同以及是否伴有异常嗜酸粒细胞增多，又分为M4a、M4b、M4c和M4Eo四种亚型。该型白血病具有特异性的免疫学标志，并常伴有特殊的遗传学异常。我们对15名形态学诊断为M4患者进行了遗传学和免疫学检测，现将结果报告如下。1材料和方法1.1研究对象15例均为2001年7月〜2003年9月在我院住院治疗患者，
4、骨髓细胞形态学拟诊为AMLM4,其中M4a5人，M4b7人，M4c1人，M4Eo2人；男性6名，女性9名,平均年龄36.9岁;外周血白细胞7.3×109/L〜23l.O×109/L,平均81.7×109/L；骨髓原幼稚细胞百分数43.0%〜87.0%,平均67.5%,其中2例异常嗜酸粒细胞增多，百分比分别为8.5%和16.5%。1.2细胞遗传学分析直接培养法和短期培养法制备骨髓细胞染色体，常规G显带按GSCN1995)标准进行核型分析。1.3间期荧光原位杂交探针均山美国Vysis公司提供，包括CBF
5、β基因双色断裂探针、MLL基因双色断裂探针、AML1/ETO双色双融合探针和BCR/ABL双色双融合探针。按试剂盒操作说明进行标本处理、变性、杂交、杂交后洗脱等操作。在NikonE600荧光显微镜下观察杂交信号，高分辨CCD摄取图像，荧光图像处理系统进行图像分析，结果判定依据试剂盒说明，每份标本计数1000个细胞。正常对照为10例非肿瘤血液病患者。1.4流式细胞术用直接免疫标记CD45设门的三色荧光标记方法，所选单抗包括：①PEIgG1+FITC-IgG1+CyChrome-CD45-IgG1；②CD33+CD117+CD4
6、5；③CD13+HLA-DR+CD45；④CD15+CD14+CD45；⑤CD34+CD19+CD45；⑥CD71+GP-A++CD45；⑦CD4+CD8++CD45；⑧CD16+CD56+CD45；⑨CD2+CD64+CD45。上述抗体购自美国Coulter公司和丹麦Dako公司。CD45/SSC设门中白血病细胞群表面标记检测阳性率≥阴性对照20%为阳性。2结果2.1染色体G显带染色体G显带核型分析正常核型6例,伴有inv(16)(pl3;q22)异常2例,伴有del(16)(q22),-X,5q-,t(8;21)(q22;q
7、22),t(9;22)(q34;qll),t(ll;17)和t(ll;?)异常各1例，另有2例无分裂相可供分析，见表1。2.21FISH2.2.1正常分界值的确定本研究X寸所有探针均做了正常分界值的界定，取值方法为正常对照组中所得阳性细胞百分数平均值+3个标准差(+3s)。2.2.2结果应用CBFβ探针对3例患者进行了检测，2例阳性，1例阴性，其中例4骨髓细胞形态学无明显异常嗜酸粒细胞增多，诊断为M4c,但染色体G显带提示inv(16),CBFβ基因重排检测结果阳性：例12骨髓细胞形态学伴有异伟'嗜酸粒细胞增多，诊
8、断为M4Eo,但CBFβ基因重排检测阴性，对这例患者进一步检测AML1/ETO融合基因，结果阳性。另用MLL探针检测了3例患者，2例阳性，I例阴性，其中例13骨髓细胞形态学诊断为M4b,染色体G显带提示有t(9
