成人混合表型急性白血病的临床和分子遗传学研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文论文⑯目成人混合表型急性白血病的临床和分子遗传学研究研究生姓名颜灵芝指导教师姓名吴德沛专业名称内科（血液病）学研究方向白血病基础与临床论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明.•所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本

2、人承担本声明的法律责任。论文作者签名:苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在

3、____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名:日期：成人混合表型急性白血病的临床和分子遗传学研究中文摘要成人混合表型急性白血病的临床和分子遗传学研究中文摘要【目的】1.系统总结单中心按WHO-2008诊断标准确诊的成人混合表型急性白血病（MPAL）患者，分析其临床、形态学、免疫学和细胞遗传学（MIC）特征。2.应用靶向外显子捕获+重测序技术及微阵列比较基因组杂交（array-CGH）技术对部分MPAL患者进行了基因突变的筛选及DNA拷贝数变异（CNVs）的检测，阐述MPAL的分子遗传学特征。3.阐述MEF

4、2C基因在急性髓系白血病中的的临床意义及生物学效应。【方法】1.从1998年1月至2011年7月期间于苏州大学附属第一医院确诊的4780例确诊的急性白血病中，按照WHO-2008标准筛选MPAL，收集患者初诊时白细胞、血红蛋白、血小板以及形态学、免疫学、细胞遗传学等资料；对于部分在我中心治疗的MPAL患者，分析其临床治疗方案及预后。2.收集MPAL患者初诊时骨髓单个核细胞，采用多重巢式RT-PCR方法对42例MPAL患者进行白血病常见的29种融合基因的检测；采用基因组DNA-PCR方法对31例MPAL患者扩增C-KI

5、T、NPM1、FLT3-TKD、FLT3-ITD、EZH2、RUNX1、ASXL1、IDH1、IDH2、CBL、WT1、TET2、DNMT3、PHF6、FBXW7、NOTCH1和ETV6共16种基因，PCR产物用直接测序法分析是否存在基因突变，另外IKZF1基因是否存在变异采用RT-PCR和毛细管电泳方法检测；利用人外显子捕获芯片对28例MPAL患者进行了与肿瘤发生相关的500种基因变异的分析；利用人安捷伦244k的CGH芯片对12例MPAL患者进行了基因拷贝数的检测，阐述MPAL患者的分子遗传学特征。3.采用实时荧

6、光定量PCR技术检测我中心83例初诊成人AML患者的骨髓液单个核细胞、12例正常对照骨髓液单个核细胞中MEF2C基因mRNA表达水平。比较I中文摘要成人混合表型急性白血病的临床和分子遗传学研究MEF2C基因mRNA表达水平在AML患者和正常对照之间以及AML各亚组之间的差异。分析MEF2C基因mRNA表达水平与AML患者无事件生存(EFS)、总体生存(OS)的关系。同时制备MEF2C过表达载体及靶向抑制MEF2C的shRNA慢病毒载体，分别侵染髓系白血病细胞株Dami，采用绝对计数等方法检测其对细胞增殖能力的影响。【

7、结果】1.117例MPAL患者临床及MIC特征分析从1998年1月至2011年7月期间在我中心确诊的4780例急性白血病患者中，根据2008年WHO标准共筛选出117例（2.4%）患者可以被确诊为MPAL（60例男性和57例女性），中位年龄为35岁（14-81岁）。MPAL患者初诊时在骨髓原始细胞比例、血红蛋白和血小板计数方面与其它类型急性白血病无明显差异，但高白细胞计数和肝脾肿大相对多见。依照FAB分型标准，40例（34%）的患者表现为AML，M1和M5多见。51例（44%）的患者被归为ALL-L1，其余26例（2

8、2%）患者依据形态学无法分类，被归为不能分类的急性白血病。117例患者中有64例（55%）为B淋系和髓系混合表达，38例（33%）为T淋系和髓系的混合表达，14例（12%）为B淋系和T淋系混合表达，另一例（0.9%）为T、B和髓三系混合表达。B和T淋系混合表达的MPAL多见于男性，14例T和B淋系混合表达的病例中有11例（79%）为男性，与其他