一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定.doc

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1、一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定摘要：从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌，编号为ＷＳ－２３８８３，其发酵提取物对多种植物病原真菌具有很强的抑制活性。对其产物进行提取精制及制备液相纯化，获得了纯度达９０％以上的化合物。生测表明，在２０μｇ／ｍＬ浓度下该抗生素对多种植物病原真菌的抑制率达１００％。根据活性产物紫外吸收光谱，可判断其为一多烯大环内酯类抗生素。质谱分析表明，活性化合物分子质量约６６７u，据此判断其为一四烯大环内酯类抗生素。关键词：多烯大环内酯；抗生素；化合物；纯化；鉴定中图分类号：S476+.1文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11421－4386-03Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，

2、ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＡKindofＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｗｉｔｈＨｉｇｈＡｎｔｉｆｕｎｇａｌＡｃｔｉｖｉｔｙＷＡＮＺｈｏｎｇ－ｙｉ１，ＺＨＡＮＧＹａ－ｎｉ１，ＬＩＷａｎ－ｄｅ２，ＺＨＡＮＧＺｈｉ－ｇａｎｇ１，ＺＨＵＸｉａｎ１，ＷＡＮＧＫａｉ－ｍｅｉ１，ＹＡＮＧＺｉ－ｗｅｎ１Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｎｅａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｓｔｒａｉｎＷＳ－２３８８３ｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｓｏｉｌｓａｍｐｌｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎＷｕｚｈｉｓｈａｎＭｏｕｎｔａｉｎａｒｅａ，Ｈａｉｎａｎｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｅｒｍ

3、ｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｗａｓｂｉｏａｓｓａｙｅｄｗｉｔｈｓｏｍｅｐｌａｎｔｄｉｓｅａｓｅｐａｔｈｏｇｅｎｓ；andｉｔｅｘｈｉｂｉｔｅｄｈｉｇｈantifungalａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｗｉｔｈｐｕｒｉｔｙａｂｏｖｅ９０％ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｍａｃｒｏｐｏｒｕｓｒｅｓｉｎｃｏｌｕｍｎａｂｓｏｒｂｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅＨＰＬＣ．Ｔｈｅｂｉｏａｓｓａｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｎｈｉｔｉｔｉｏｎｒａｔｉｏｗａｓ１００％ａｔｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒｉｔｉｏｎｏｆ２０μｇ／ｍＬ．ＴｈｅＵＶａｂｓｏｒptionｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｄmａｓｓ

4、ｓｐｅｃｔｒｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｗａｓａｔｅｔｒａｅｎｅｍａｃｒｏｌｉｄｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｅｎｅｍａｃｒｏｌｉｄｅ；ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ；ｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌，其发酵提取物对多种供试植物病原真菌及某些腐生真菌具有很强的抑制活性。采用常规方法对该菌的发酵产物进行了提取精制，得到了纯度在９０％以上的样品，从目标产物的紫外吸收光谱可判断其为一多烯类抗生素。ＨＰＬＣ－ＭＳ检测表明，活性产物分子离子峰为６６７，可以确定其分子质量约为６６７u，综合分析后

5、确定其为一四烯大环内酯类抗生素。１材料与方法１．１菌株１．１．１抗生素产生菌编号为ＷＳ－２３８８３，从海南五指山采集的土样中分离得到，由湖北省生物农药工程研究中心保存。１．１．２生测指示菌番茄灰霉病菌、小麦颖枯病菌、小麦赤霉病菌、水稻纹枯病菌、水稻稻瘟病菌、毛霉均为湖北省生物农药工程研究中心保存。１．２培养基１．２．１种子培养基葡萄糖－酵母粉－麦芽提取物培养基。采用带挡板的５００ｍＬ三角瓶，装量１００ｍＬ。１．２．２抗生素发酵培养基甘露醇－豆胨液体培养基。采用带挡板的５００ｍＬ三角瓶，装量１００ｍＬ。１．２．３生测培养基采用ＰＤＡ培养基。用管碟法生测时，下层琼脂质量分数为１．５％，上层琼脂质量

6、分数为１．０％。用９６孔板进行生测时，琼脂质量分数为０．８％。１．３主要仪器设备Ｂ?�BＣＨＩＲＯＴＡＶＡＰＯＲＲ－２００型旋转蒸发仪，瑞士生产；分析型液相色谱仪：Ｗａｔｅｒｓ２６９０采用２９９６二极管阵列式检测器；制备型液相色谱仪：Ｗａｔｅｒｓ２５２５泵，２７６７自动收集系统，２９９６二极管阵列式检测器；液质联用分析仪：Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪，采用Ｗａｔｅｒｓ９９６二极管阵列式检测器，ＭａｓｓｌｙｎｘＶ４．０色谱工作站，美国ＭｉｃｒｏｍａｓｓＱｕａｔｔｒｏｍｉｃｒｏ?�R四极杆质谱仪，电喷雾离子源，ＭａｓｓｌｙｎｘＶ４．１液质联用分析软件。１．４主要试剂色谱纯级甲醇、乙腈均为天津

7、基准试剂有限公司生产；分析纯乙醇，西陇化工股份有限公司生产；大孔吸附树脂Ｄ３５２０，南开大学化工厂生产；液质联用氮气，购自武汉市汉阳钢厂，纯度为９９．９９９％。１．５色谱条件１．５．１分析条件采用美国ＳｕｎｆｉｒｅＣ１８柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为０．３ｍＬ／ｍｉｎ。１．５．２制备条件制备柱采用美国ＳｕｎｆｉｒｅＯＢＤＣ１８柱，２５０ｍｍ×１９ｍｍ，粒径为１０μｍ；柱温为室温；流动相为水