食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定

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1、广州大学综合设计性实验报告学院生命科学学院課程微生物学实验实验项目实验八食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定实验题目北亭村饭店饮用水中微生物的检测、分离纯化和初步鉴定专业生物科学年级、班别姓名学号任课教师完成日期2012-12-1011实验八食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定—北亭村饭店饮用水中微生物的检测、分离纯化和初步鉴定【摘要】目的通过对北亭饭店饮用水中微生物的检测来提高人们对饮食健康的进一步的认识，加强人们的卫生意识，为了更好地分析饮用水中微生物的含量。方法本实验应用平板菌落记数技术测定饮用水中细菌总数和进行生理生化鉴定。由于北亭饭店饮用水中细菌种类繁多

2、，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是饮料中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值。本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。所谓细菌总数，指1毫升检样中所含的细菌菌落的总数。还有就是通过V-P反应、糖发酵试验、革兰氏染色以及芽孢染色等初步的鉴定试验来进行检测。结果通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其平均值得到，菌落数为每毫升饮用水中4600个细菌菌落。结论饭店饮用水虽然符合国家卫生标准，但其中细菌含量还是较多，我们

3、应当慎重饮用，或使用前进行加热处理。【关键词】：饮用水微生物检测分离鉴定随着环境污染问题的日益严重，饮用水的生物污染也日益严重，公众对影响健康的病原微生物更加关注。据统计，在不发达国家，有400多万儿童死于水传播性疾病，约有15%的儿童5岁前死于腹泻。在饮用水中不断发现新的对人类造成重大危害的病原微生物，随着环境污染的加剧，还会产生一些新的病原微生物。1材料、原理和方法1.1采样为了更清楚地了解我们经常饮用的水的微生物的含量，该实验我们选用了大家经常聚餐的地点北亭村饭店的饮用水。1.2实验用品1.2.1器材普通光学显微镜，电子秤，手提式高压灭菌锅,超净工作台，无菌

4、培养箱，114℃冰箱，恒温箱，250mL锥形瓶，无菌培养皿，无菌大小试管，无菌1mL移液管，载玻片，胶头滴管，试剂瓶，烧杯，擦镜纸，酒精灯,接种环，试管架，酒精棉球，吸水纸，无菌平板，三角玻棒，玻璃棒,无菌棉塞，药匙等。1.2.2试剂培养基牛肉膏蛋白胨培养基，乳糖发酵培养基，葡萄糖糖发酵培养基试液无菌（生理盐）水，无菌培养皿，无菌移液管，95%乙醇，香柏油，二甲苯，卢戈氏碘液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，草酸铵结晶紫染液。1.3实验原理1.3.1培养基的配制与灭菌。培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各

5、种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。配制培养基是不仅需要考虑满足这些营养成分的需求，而且应该注意各营养成分之间的协调。此外不同微生物对pH要求不一样，酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。配制培养基的流程如下：原料称量、溶解、加琼脂熔化、调节pH值、分装、塞棉塞和包装、灭

6、菌由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌效果。高温的致死作用，主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要大分子发生变性。高压蒸汽灭菌是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的灭菌方法，本实验同样采用高压蒸汽灭菌。1.3.2微生物的分离与纯化。自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微

7、生物的分离与纯化。一般是根据微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某些抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法。本次是从中菌悬液中分离多种菌株，实验将采用稀释平板分离法利用选择性培养基分离菌种。1.3.3分离菌株的鉴定。微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、形态、细菌特点及生理生化等方面进行鉴定。各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和过氧化氢的能力不同。这些都反映了它们是有不同的酶系统。细菌的这种生

8、化反应的多