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1、特产研究SpecialWildEconomicAnimalandPlantResearch1999年第4期53文章编号:1001-4721(1999)04-0053-02红参须根中多肽的新组分1122焦连庆,于敏,魏俊杰,徐景达(11吉林省中医中药研究院长春130021;21白求恩医科大学130200)摘要采用超滤、大孔树脂、SephadexG-25柱层析、DEAE-Cellulose分步抽提和反相高效液相色谱分离,从红参须根中分得3种红参须根多肽(RGHP),分别是RGHP-ⅡB1(48肽)RGHP-ⅡB3(29肽),RGHP-ⅡB4(30肽
2、)。关键词红参须根多肽(RGHP);反相高效液相色谱(RPHLC)中图分类号:R28411文献标识码:A〔1〕以前报道了从红参须根中采用RPHPLC法从红参须根中分得一个新多肽RGHPⅡB2,现在报道从红参须根中分得另外三种多肽。1材料与仪器红参须根购自抚松第一参场,SephadexG-25瑞典hpamacia公司产品,Waters高效液相色谱仪,DEAE-Cellulose(DE32)瑞典Whatman公司产品,YWG-C18(5mm×200mm)色谱柱大连色谱技术开发中心制造。层析检测仪系X2-87-1型紫外检测仪,浙江温州鹿城生化仪器厂,
3、氨基酸组成分析用日立835型氨基酸自动分析仪。2提取和分离211提取红参须根粗粉215kg,蒸馏水浸提48h,提取液经高速离心,取上清液真空薄膜浓缩至原体积的1/10,浓缩液经超滤,得超滤下液。212大孔吸附树脂吸附:大孔吸附树脂(D4020)反复处理后,装柱(10cm×60cm),然后将超滤液分次置于柱中反复进行吸附,以蒸馏水洗脱,流出液以紫外检测仪220nm进行检测,收集紫外有吸收部分进行真空冷冻干燥,得浅黄色粉末。213SephadexG-25柱层析用蒸馏水平衡柱子(116cm×50cm),上述浅黄色粉末1g溶于少量蒸馏水中,离心(120
4、00r/min)后上样。蒸馏水洗脱,合并第3～10管峰Ⅱ为小分子多肽类化合物,同条件层析100次,峰Ⅱ合并后,真空冷冻干燥。214DEAE-cellulose分步抽提以0101mol/LNH4HCO3溶液平衡柱子,样品为SephadexG-25层析峰Ⅱ。用0101～1mol/LNH4HCO3线性梯度洗脱,根据峰ⅡA(8～17管)、ⅡB(18～25管)、ⅡC(26～27管)、ⅡD(28～34管)中第17,25,27,34管的电导强度与浓度的线性关系Y=4105×+0177,求出峰ⅡA、ⅡB、ⅡC、ⅡD的洗脱溶液浓度(mol/L)分别为峰ⅡA(01
5、07),峰ⅡB(0133),峰ⅡC(0143),峰ⅡD(0151)。根据收稿日期:1999-04-20作者简介:焦连庆(1965-),男,吉林省长春人,吉林省中医中药研究院副研究员,白求恩医科大学硕士生,从事生药药化研究。54特产研究1999年各个峰的洗脱浓度进行分步抽提。分步抽提后,将抽提液真空冷冻干燥。215RP-HPLC分离将RGHP-ⅡB100mg溶于2ml流动相中,离心(12000r/min,20min)后进样,进样量30μl。组分ⅡB经RP-HPLC法分离,流动相:60%CH3CN、40%H2O(115%TFA),检测波长215nm
6、分离成4个部分ⅡB1、ⅡB2、ⅡB3、ⅡB4,重复进样40次,分别收集峰尖部分冻干。3多肽的氨基酸组成经过RP-HPLC分得的组分ⅡB1、ⅡB3、ⅡB4即红参须根多肽RGHP-ⅡB1,RGHP-ⅡB3,RGHP-ⅡB4,以517mol重蒸HCL溶解,充N2熔封后,在110℃恒温水解24h,用氨基酸分析仪进行氨基酸组成分析,结果见表1。4讨论RGHPB-ⅡB1、RGHP-ⅡB3、RGHP-ⅡB4与RGHP-ⅡB2除了氨基酸残基数不同外,在组成上也有一定差异,RGHP-ⅡB1、RGHP-ⅡB3、RGHP-ⅡB4含有蛋氨酸,而RGHP-ⅡB2则不含有
7、;RGHP-ⅡB2含有脯氨酸,其它三者则不含有。在RGHP-ⅡB中RGHP-ⅡB2为主要组分。参考文献1焦连庆等,红参须根中多肽成分的分离与鉴定〔J〕1中草药,1996,27(2):70
