多肽溶解指南.pdf

《多肽溶解指南.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、多肽溶解指南合适的溶解方法是多肽实验成功的重要因素。不合适的溶解会造成多肽的损失和实验的失败；然而，寻找理想的溶解方法有时相当有挑战性。您可以通过本指南中的步骤来选择最佳溶解方法，建议在溶解之前进行小试：通常先用蒸馏水或无菌水进行小试，长度小于五个氨基酸的寡肽尤其如此。对于其他的特殊多肽，需要根据多肽的序列优化溶解条件。溶解小试指南：1.将多肽序列中的每个酸性氨基酸包括天冬氨酸Asp（D），谷氨酸Glu（E）和C端的羧基-COOH赋值为-1；每个碱性氨基酸包括精氨酸Arg（R）,赖氨酸Lys（K），组氨酸His（H）和N端的氨基-NH

2、2赋值为+1；中性氨基酸为0。以此为基础计算整条多肽的值，得分为正的称为碱性多肽，得分为负的称为酸性多肽，得分为零的称为中性多肽。2.如果是碱性多肽，先尝试用水溶解；如果不能溶解，尝试使用10%-30%的醋酸；如果多肽还是不溶，尝试使用纯醋酸和三氟乙酸TFA(<50μl)来溶解，然后将多肽溶液稀释到需要的浓度。3.如果是酸性多肽，先尝试用水溶解；如果用水不能溶解，尝试使用13%氨水（v/v）来溶解，并将多肽溶液稀释至需要的浓度。如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys（C），不能使用碱性溶液进行溶解。请尝试下面的方法。4.中性多肽通常用有机溶

3、剂来溶解。首先，尝试使用乙腈（acetonitrile），或甲醇（methanol）或异丙醇（isopropanol）进行溶解；对于疏水性非常强的多肽，先用少量的二甲基亚砜（DMSO）溶解，并用水稀释到需要的浓度；如果多肽序列中含有半胱氨酸Cys（C），使用二甲基甲酰胺（DMF）或N-甲基吡咯烷酮(NMP)进行溶解。对于容易聚集的多肽，先加6M的胍盐酸（guanidine•HCl）或8M的尿素（Urea）来溶解，然后稀释到需要的浓度。说明：1.为了方便储存及后续使用，建议将多肽溶解至浓度为1-2mg/ml左右。2.普通多肽冻干粉可在-

4、20度保存一年以上，对于已溶解的多肽，建议分装后储存于-20℃；如多肽序列中含有甲硫氨酸Met（M），半胱氨酸Cys（C）或酪氨酸Tyr（Y），建议保存于无氧环境防止氧化。附氨基酸列表：种别氨基酸特点中性氨基酸甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、甲硫氨这类氨基酸分子中只含有一个氨基酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、天门和一个羧基冬酰胺和谷氨酰胺酸性氨基酸谷氨酸、天门冬氨酸这类氨基酸分子中含有一个氨基和二个羧基碱性氨基酸赖氨酸、精氨酸、组氨酸这类氨基酸的分子中含二氨基一羧基；组氨酸具有氮环，呈弱碱性，

5、也属碱性氨基酸