多肽检测方法研究进展-论文.pdf

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1、2014年第5期深圳职业技术学院学报NO．5，2014DOI：10．13899／j．cnki．szptxb．2014’05．0l1多肽检测方法研究进展栾崇林，蒋晓华，金刚，代建国(深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院，广东深圳518088)摘要：本文对质谱法(MS)、液相色谱质谱联用法(LC—MS)、毛细管电泳质谱联用(CE—MS)法、光谱分析法等在多肽检测中的最新进展进行了综述．质谱检测多肽最大的优势在于稳定性、重现性好，准确性高．采用色谱或电泳分离技术与质谱联用可解决相同氨基酸组成但序列不同的多肽的检测．光谱技术

2、检测多肽，通常无需样品预处理分离，且光谱技术设计的多肽传感方式灵活多变，但光谱技术往往需要借助其他方法才可对多肽进行定性分析，因此该方法不具有普遍性．关键词：多肽；质谱；色谱；荧光；检测中图分类号：0656．31文献标志码：A文章编号：l672—0318(2014)05—0054—06多肽通常是指由10～100个氨基酸分子脱水缩定性、重现性好，准确性高．目前将质谱技术应用合而成的化合物．也有文献将2～l0个氨基酸组成于多肽检测主要有基质辅助激光解吸飞行时问质谱的肽称为寡肽，l0～50个氨基酸的组成的肽称为(MALDI～

3、TOF—MS)方法、液相色谱一质谱联用多肽，50个以上氨基酸组成的肽称为蛋白质【JJ．多(LC—MS)方法以及毛细管电泳一质谱联用(CE—MS)肽种类繁多，几乎参与生物体的生长、发育、免方法．疫、新陈代谢等各个环节，如促进矿物质吸收的MALDI—TOF—MS法所用仪器主要由2部分组肽(CPPS)、酶调节剂(如促胰酶肽)、激素肽(如成：基质辅助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞生长激素释放因子GRFS)等[21．多肽作为生物标行时间质量分析器(TOF)．MALDI的原理是用激志物还涉及到某些疾病的病理研究，如B淀粉样光

4、照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光肽在脑中的沉积与阿尔兹海马病密切相关J，血中吸收能量传递给生物分子，电离过程中将质子转清多肽对于一些恶性肿瘤的诊断也很有帮助【／J．除移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分此以外，某些动物在受到外界刺激时，会产生大子电离．TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过量的具有抗菌活性的多肽，这些多肽不仅具有很飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检强的杀菌能力，有的还可杀死肿瘤细胞l8]，这类测，即测定离子的质荷比(M／Z)与离子的飞行时特殊的多肽被称为抗菌肽，目前并己被应用

5、于食间成正比．MALDI—TOF—MS法具有灵敏度高、准品、饲料添加剂及药物的开发等．本文根据检测确度高、分辨率高及自动化程度高、分析速度快等技术的分类，对检测多肽的新方法研究进展进行特点，而且能满足多肽组学和蛋白组学高通量检测综述，并对多肽检测领域的发展前景进行展望．分析的要求．然而MALDI—TOF-MS法对多肽检测时，它仅对含精氨酸的多肽有较高的精确度．20001质谱法及其联用方法年，Hale课题组提出将赖氨酸上的￡氨基修饰0一用质谱所检测出的多肽质量谱图，通常被称甲基异脲，使其变成高精氨酸，这样使得赖氨酸也为指

6、纹图谱．质谱检测的多肽最大的优势在于稳很容易被检测到，此方法大大提高了检测胰蛋白酶收稿日期：20140115项目来源：深圳市基础研究计划资助项目(No．20120531204l10)作者简介：栾崇林(1965)，山东人，博士，教授，主要研究方向：电化学传感技术分解的多肽片段的灵敏度，并对于含有很高的因此若能提高半胱氨酸的检测灵敏度便能提高质谱(赖氨酸／精氨酸)含量比值的多肽的检测非常低丰度蛋白、多肽检测灵敏度．2012年Shimada等有效J．2010年，Wu课题组首次报道了将半胱人设计了6种半胱氨酸的标记物，大大提高

7、了氨酸修饰的Mn2掺杂ZnS纳米颗粒(即MALDI—TOF—MS检测含有半胱氨酸的多肽的检测Mn2+_dopedZnS@cysteineNPs)作为基质，用灵敏度，从而也提高了亲水性多肽、低丰度多肽的MALDI—TOF—MS检测多肽的方法L1刚．与其他的基检测灵敏度_J引．质相比，如ZnSNPs、Zn@CyseineNPs以及0【一氰然而，质谱在检测具有相同氨基酸组成但序列基一4一羟基肉桂酸(CHCA)，在水相中合成的该不同的多肽时，由于它们具有相同的分子量，给出Mn2+-dopedZnS@cysteineNPs纳米基

8、质在检测小等同的分子离子峰，因此不能满足多肽结构的解析分子多肽方面以及在检测灵敏度方面更具优越性，工作．采用色谱或电泳分离技术与质谱联用是解决并且此方法成功应用到了尿样中多肽混合物的检这一问题的很好途径．2003年，Thomas等人将液测．随后，2011年Lie课题组研究出了简单、灵敏、相色谱法与质谱联用，实现了血管紧张肽II、铃