多肽类物质分析检测方法的研究进展

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1、上海化工Vol.34No.11··6ShanghaiChemicalIndustryNov.2009专家论坛多肽类物质分析检测方法的研究进展杜晓宁宋明鸣上海化工研究院（上海200062）摘要在蛋白质组学研究中，多肽类物质的分析测定是非常重要和活跃的研究领域，从中可以发现和利用其重要的生物活性组分，是目前新药物研发的关键。近年来，随着新仪器和检测技术的开发，国内外在研究多肽的分析检测方法上取得了较大进展。就目前国内外多肽类物质分析测定的最新方法和进展情况加以概述。关键词多肽分析高效液相色谱毛细管电泳质谱中图分类号TQ464

2、.7多肽是一种由56个天然氨基酸以不同组成和技术和检测仪器不断涌现，对于多肽，无论是在其结排列方式构成的聚合物，当氨基酸残基在20个以下构测定还是测序方面均取得了巨大的进展。目前，高时称为寡肽，超过20个氨基酸残基则称为多肽，当效液相色谱（HPLC）、毛细管电泳（CE）、质谱（MS）及聚合的氨基酸多于50个时，常称为蛋白质。通常在其联用技术已成为多肽测定的主要手段，并正得到不严格区分的情况下，寡肽和多肽都称为多肽。越来越广泛的应用。多肽广泛存在于自然界中，并对人体有着重要2.1高效液相色谱（HPLC）及其联用技术的生理作

3、用。近年来，随着生命科学研究的蓬勃发HPLC最早出现于20世纪60年代，因其具有展，有关多肽的研究进展也日新月异。多肽已在免疫分离效率高、分离速度快等优点，一经面世便迅速解功能、信息传导、细胞分泌、前体信号、疾病发生及治决了当时大量不适于利用气相色谱（GC）进行分析疗等方面显示出了神奇的研究应用价值。在对多肽的物质的分离、分析。特别是自70年代中期以后，电的结构与功能研究过程中，必然会涉及多肽的测定。子和计算机技术应用于液相色谱仪，大大提高了仪目前，多肽的测定主要包括结构的测定（即测定多肽器的自动化水平和分析精度，加速了

4、HPLC的发展。的氨基酸组成、含量）及多肽测序（即组成多肽的氨近年来随着生物工程和生命科学的迅速发展，为基酸的连接次序）。本文就目前国内外多肽类物质分HPLC分析技术提出了更多、更新的分离、分析要析测定的最新方法和进展情况加以概述。求，大大促进了这一技术的迅速发展。特别是微柱液相色谱、多维液相色谱的出现和电喷雾质谱与液相1多肽测定的传统方法色谱的联用，为生物大分子（如蛋白质、多肽等）的分传统的多肽结构测定方法是采用柱前或柱后衍析鉴定提供了强有力的工具。[2]生的氨基酸分析方法测定多肽水解后得到的各种氨吕艳等采用异硫氰酸苯

5、酯柱前衍生、反相高效基酸及其含量，以确定其组成；同时，还可根据氨基液相色谱、外标法定量的方法分析了多肽中18种氨酸的数目计算多肽含量。基酸组成，并以各种氨基酸的峰面积为纵坐标，氨基经典的多肽测序方法有N-末端序列测定的化酸标液的质量浓度（mg/L）为横坐标，进行线性回归。[1]2学方法（Edman降解法）和C-末端酶解方法两种，除了半胱氨酸外，其他氨基酸R值均大于0.99，从分别是利用不同的物质与多肽的N-端氨基或C-而建立了一种分析多肽组成的定量测定方法。王贤[3]端羧基反应生成相应的氨基酸。并将这一反应重复纯等采用反

6、相高效液相色谱与串联质谱（RPLC-循环，测定多肽中的氨基酸排列顺序。MS/MS）对化学合成的九肽（Tyr-Val-Asn-Val-Asn-Met-Gly-Leu-Lys）产物进行检测，经串联质谱鉴定2多肽测定方法的新进展表明，其主要成分为目标九肽，副产物包括两种九肽随着科学技术发展的日新月异，各种新的测试衍生物：一种为其中的酪氨酸氧化生成，另一种为其第一作者简介：杜晓宁女1955年生教授级高工从事同位素化学与仪器分析第11期杜晓宁等：多肽类物质分析检测方法的研究进展··7[4]中的蛋氨酸氧化生成。四川大学杨寒朔等运用加

7、剂，在35min内进行了较好地分离。所得的色谱nano-UPLC-TOF-MS方法首次对斑马鱼早期胚胎图基线平稳、分离度较高。为进一步利用毛细管电泳中小分子多肽通量进行了检测，证实斑马鱼胚胎中技术进行蛋白复合物多肽的分离奠定了良好的基[13]确实存在着小分子多肽，大部分多肽的相对分子质础。C.Desportes等报道用液相色谱从葡萄酒中分量集中在800～1400范围内，估计为10氨基酸左离肽，并用毛细管电泳对分离的肽进行纯度分析，毛右的多肽，为进一步鉴定和研究斑马鱼胚胎中的小细管的操作条件为：25nM的磷酸缓冲液、pH=

8、2.5、30kV、20℃。崔波等[14]分子多肽奠定了理论和方法学基础。在国外，还曾报道通过毛细管区带电EsquivelB等[5]采用HPLC法在CrownpakCR（+）柱泳，不断改变缓冲液的pH值，使其分布于等电点以上对几种二肽及三肽对映异构体进行了成功分离及上和以下，以迁移率对pH值作图，当迁移率为零时[15]