多肽物质分离与分析方法研究进展

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1、48《中国海洋药物》杂志2000年第3期(总第75期)·专题讲座·多肽物质分离与分析方法研究进展赵锐顾谦群管华诗(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所,青岛266003)摘要综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法,主要包括高效液相色谱法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。关键词多肽,分离,分析,进展多肽类化合物广泛存在于自然界中,其有利的方法手段,因为蛋白质、多肽的HPLC中对具有一定生物学活性的多肽的研究,一应用与其他化合物相比,在适宜的色谱条件直是药物开发的一个主要方向。生物体内已下不仅可以在短时间内完成分离目的,更重知的活

2、性多肽主要是从内分泌腺组织器官、要的是HPLC能在制备规模上生产具有生分泌细胞和体液中产生或获得的,生命活动物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病制备的最佳条件上,不少学者做了大量的工变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材现代科技的飞速发展,从天然产物中获得肽料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究类物质的手段也不断得到提高。一些新方法、的内容。新思路的应用,不断有新的肽类物质被发现11111反相高效液相色谱(RP2HPLC)应用于防病治病之中。本文介绍了近几年肽结果与保留值之

3、间的关系:利用RP2类物质分离、分析的主要方法研究进展。HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留[2]1分离方法系数,Wilce等利用多线性回归方法对采取何种分离纯化方法要由所提取的组2106种肽的保留性质与结构进行分析,得出织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系,质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交肽中,可减少在柱上的保留时间;在10～60换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解氨基酸组成的肽中

4、,非极性氨基酸较多也可[1]法等。这些方法常常组合到一起对特定的减少在柱上的保留时间。而含5～25个氨基物质进行分离纯化,同时上述这些方法也是酸的小肽中,非极性氨基酸增加可延长在柱蛋白、多肽类物质分析中常用的手段,如层上的保留时间。同时有不少文献报道了肽链析、电泳等。长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的111高效液相色谱(HPLC)影响,并利用计算机处理分析得到每种多肽[3]HPLC的出现为肽类物质的分离提供了的分离提取的最佳条件。《中国海洋药物》杂志2000年第3期(总第75期)49肽图分析(PeptideMapping):肽图分析态的分子更为方便

5、。如人重组生长激素是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基(hGH)的分离,不同结构、构型的GH在SEC酸组成特点,使用专一性较强的蛋白水解酶柱上的分离行为完全不同,从而可分离不同[一般为肽链内切酶(endopeptidase)]作用于构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断,通过体。利用SEC研究修饰化的PEG的分离方[7]一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱。法,此PEG具有半衰期长、作用强的特点。肽图分析对多肽结构研究和特性鉴别具有重一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分要意义。利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg离分析。和L

6、ys羧基端的肽链的性质,通过RP2HPLC11114离子交换色谱(Iron2Exchange法采用C18柱检测了重组人生长激素(rhGH)chromatography,IEXC)的肽片断,成功获得了人生长激素特征性胰IEXC可在中性条件下,利用多肽的带[4]肽图谱。同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。其解也制得,并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾可分为阳离子柱与阴离子柱两大类,还有一[5]的不同种属来源的胰岛素。人类肿瘤坏死些新型树脂,如大孔型树脂、均孔型树脂、离因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂

7、糖凝胶树脂分析技术确定了肽图,便于鉴定分析。此项技等。在多肽类物质的分离分析研究中,对多肽术已经在新药开发中得到广泛应用。的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多,不同11112疏水作用色谱(Hydrophobic的多肽分离条件有所不同,特别是洗脱剂的interactionchromatography,HIC)离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。Wu[8]HIC是利用多肽中含有疏水基团,可与等报道利用离子交换柱层析法,探讨分离固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的牛碳酸酐酶异构体和牛血清白蛋白、鸡血清目的,其比RP2HPLC具有较少使多肽变性白蛋白酶的提取条件,

8、获得了有价值的数据的特点。利用HIC分离生产激素(GH)产品供今后此类物质分离研