完整序列cdna技术

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1、完整的cDNA序列获取技术（RACE）学院：动物科学学院专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：分子遗传学与动物育种姓名：彭邦星学号：2012021975任课教师：刘若余教授2012年10月完整序列cDNA技术§摘要：完整序列cDNA技术是研究基因功能的重要手段。cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。完整的cDNA序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。RACE技术的成功应用充分显示了它是一种快速有效获得cDNA全长，特别是从微量mRNA克隆全长cDNA的手段，并且在其他方面的应用也发挥了巨大作用。伴随着RACE技术的改良和进一步发展，优化PCR

2、扩增条件提高其效率和忠实性，今后RACE会在基因克隆以及RNA剪接、基因家族和基因表达变化的研究中有很大发展前景。§关键词：cDNA序列RT-PCRRACETheTechnologyofAcquiringCompletecDNASequenceAbstrac：ThecompletesequenceofthecDNAtechnologyisanimportantmeanstostudygenefunction.cDNAcompletesequenceoftheobtainedgenestructure,proteinexpression,andgenefunctioniscr

3、ucial.ThecompletecDNAsequencecanbeobtainedthroughthelibraryscreeningandtheendcloningtechnology.ThesuccessfulapplicationoftheRACEtechnologydemonstrateditisaquickandeffectiveaccesstofull-lengthcDNAclonedfull-lengthcDNAofmeans,especiallyfromatraceamountofmRNA,andinotheraspectsoftheapplication

4、alsoplayedahugerole.AccompaniedbytheimprovementandfurtherdevelopmentoftheRACEtechnology,optimizethePCRamplificationconditionstoimprovetheirefficiencyandfidelity,futureRACEcloningandRNAsplicingandgenefamilyandgeneexpressionchangehasgreatdevelopmentprospects.Keywords:RACE;cDNASequence;PCR1.前

5、沿：近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多新基因的方法和手段，如图谱技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术.二减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapidamplificationofcDNAends,RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端，包

6、括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点1.cDNA定义：cDNA是染色体的主要化学成分，同时也是基因组成的，有时被称为“遗传微粒”。RNA链互补的单链DNA，以其RNA为模板，在适当引物的存在下，由RNA与DNA进行一定条件下合成的，就是cDNA（百科解释）因为基因上并不是全部都表达的DNA片段，比如内含子，在基因转录的时候是要一段全都转录的，这就需要将转录来的mRNA中不需要的部分切除，然后再拼接。也就是说用RNA逆转录出来的DNA单链是比原来的短的，这个纯粹有基因表达序列的DNA这个就是cDNA。2.RA

7、CE原理：3‘一RACE(的一般过程是:以多聚胸腺嘧啶、T重复寡核苷酸oligo(dT)17和在许多文章中被称为锚引物(anchorPrimer)或接头(adaPtor)的序列组成的引物QT逆转录mRNA。得到第一条cDNA链,然后用含部分锚引物序引物Q。与基因特异性引物GSPI进行第一轮扩增得到双链cDNA,第二轮扩增则采用内部引物(nestedprimer)Q1和GSPZ,以防止产生非特异性扩增产物。采用同样的原理可以进行5‘一RACE。先用基因特异性引物GSP一RT逆转录mRNA获得CDNA第一条链,然后用末