东北虎胎盘cdna文库构建及其ests序列分析

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1、．．義去苗—．．－１．．学校代码：１０２２５＇＂＊■＇＇－学号Ｓ１５５４８．：：Ｉ：知Ａ征二学化冷文＞东北虎胎盘ｃＤＮＡ文库构建及其ＥＳＴｓ序列分析李倩张明海教授东北林业大学关伟军研究员中国农业科学研究院畜牧兽医研究所申请学位级别：硕±学科专业：野生动物保巧与利用论文提交日期；２０１５年０４月论文答辩日期：２０１５年０６月授予学位单位：东北林业大学授予学位日期；２０１５年０６月答辩委员会主席：论文评阅人：东批ｉ欠绛－－

2、＞Ｘ’、Ｉ．、’一－、－－：．．、．一．：共＇＇Ｖ兴：一哥＾＾晋叫，ｔＶＶＶ：巧可巧苗骑及乂．ｖ乂’：—：’方＇ｒｉ異嫌弊占為；嶺新臀雜艇－气ｒ一－？＼＼：－．‘．对■＂’二中，一．＾ｉ．ＸＶ＇．如．ｔ．＇．．心．．占－？＇．呵．．Ｖｔｒｒ；這了乃早巧＇．心巧谁巧二咒山、古苗拉片，．亢載＇’’，＇、＇一Ｉ，—．、’Ｖ、？ｎ－．—》一．ｒ、＂．、，Ｓｊｖ一．－ｆ．．訂．款吟托．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣ

3、ｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：Ｓ１５５４８ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｃＤＮＡ邮ｒａｒｙＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄＥＳＴｓＡｎａｌｓｉｓｏｆｙ’ＡｍｕｒＴｉｅｒｓＰｌａｃｅｎｔａｇＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＬｉＱｉａｎＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎｇＭｉｎｇｈａｉＡｓｓｏｃｉａｔｅＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＧｕａｎｗｅｉｕｎｊＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒ化Ａｐｐ

4、ｌｉｅｄ化ｒ：ＭａｓｔｅｒＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＷｉｌｄｌｉｆｅＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏ凸ａｎ过ＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎＤａｔｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｌｙ１５，２０Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ摘要摘要’（化／５３＿？（３＾心）是现存５个虎亚种中东北虎５扣６＾３（攻。个体最大者，国一家Ｉ类重点保护动物，全球最额危物种之温带森林生态系统中的旗舰种。长，期Ｗ来，，东北虎生存环境的严重破坏，猎物资

5、源匿乏人类乱捕乱杀等因素，导致野生东北虎处于绝灭的境地，及时开展东北虎遗传资源保存及相关分子生物学。研巧，具有非常重要科学价值和保护意义本文选取圈养东北虎胎盘为研巧材料，运用现代分子生物学方法ｃＤＭｃＤＮＡ，构建了东北虎胎盘的文库，并对文库的质量进行了鉴定，获得了如下的研究成果：２ｒｚｏ—１、Ｗ．５岁龄的东北虎胎盘组织为研究材料，运用Ｔｉｌ步法提取胎盘一ＲＮＡ－的总。经过反转录合成第链，再经过ＬＤＰＣＲ形成双链ｃＤＮＡ，经过蛋白酶Ｋ的消化和ＳｆｉＩ酶切后经过层析柱分离出的大片

6、段ｃＤＮＡ与载体Ａ化ｉｌＥｘ２进ｐ行连接，最后包装连接，获得了东北虎胎盘ｃＤＮＡ文库。原始文库库容量为６组率为９２．７９Ｘ１０ｐ化／ｍｌ，重９８．２％，扩增后的文库库容量达到日Ｘ１０ｐ扣／ｍｌ，重组率为９５．３％，随机挑选３００个阳性菌斑进行ＰＣＲ检测，获得的文库中插入片段的长？度范围在０．５３．０肺之间，并且片段的平均长度为０．８９肺。２３００ＢＡＮＫＢＬＡＳＴ、通过随机挑选个克隆展开测序工作，运用組ＮＥ中的对测得的序列进行比对分析，获得了２０８个原始序列，去除掉

7、测序质量比较差和很短（＜２００ｂ）的序列，最后获得了１５８条有效的ＥＳＴｓ序列ｐ。大部分序列长度都？大于３（Ｋ）ｂｐ，主要集中的在６００９００ｂｐ之间，测序成功率达到９０．２％。这些序列，即细胞组成，分子功能经过ＧＯ分析分成Ｈ大类，生物进程。一３１２、在ＧＯ分类结果中与分子功能方面相关的注释有共有个，与细胞姐成方面相关的有１９个而与生物过程方面相关的注释有巧个，分别占到了２１．５％、，一ｃｅ３３．９％４４．６％。细胞组成中位列第的是ｃｅｌｌａｒｔｌｌ。和ｐ；其次是分子功能

8、一ＤＮＡ中位列第的是各种、ＲＮＡ、蛋白质、离子等的结合活性。生物进程中细胞过程的比例最大。ＧＯ分类发，也能；其次是代谢过程现同基因有不同的分子功能参与不同的生物学过程，这反映了东北虎生命过程的复杂性。４Ｉ。、运用ｎｔｅ巧ｒｏ检索，对９５个序列蛋白质结构域解析进行检索对得到的结果分析，在Ｉｎｔｅ巧ｒｏ数据库中共有５６个化ｉｇｅｎｅ得到注释，涉及１８１个０ＲＦ。将９