人参叶和根cdna文库构建及表达序列标签分析

《人参叶和根cdna文库构建及表达序列标签分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、东北师范大学博士学位论文人参叶和根cDNA文库构建及表达序列标签分析姓名：王颖申请学位级别：博士专业：细胞生物学指导教师：李玉新;鲍永利20070501中文摘要人参作为一种传统的药用植物已有几千年的应用历史，现代药物化学和药理学研究证实了人参中的各种有效成分对中枢神经系统、心血管系统、消化系统、内分泌系统和免疫系统均具有明显的调节作用，但是目前关于人参有效成分的生物合成途径及其调控的基础研究相对缺乏。为了保存人参基因资源，并在基因水平上研究人参有效成分生物合成的调控机理，我们分别构建了人参叶和根组织的全长cDNA文库，并对文库中部分基因序列进行了分析

2、。本论文分别以六年生人参叶和四年生人参根为研究材料，用Trizol法提取总RNA后，应用Clontech公司的SMART技术构建了两个表达型九噬菌体全长cDNA文库。经检测人参叶原始eDNA文库含6．55x105个克隆，重组率为81％，插入片段长度在O．3-2．5kb之间。人参根原始eDNA文库含4．90x105个克隆，重组率为80％，插入片段长度在O．3-2．0kb之间。两者均符合cDNA文库构建的标准要求。通过对文库中200个重组克隆的序列分析，获得了124条有效ESTs，经DNAStar软件中的Seqman程序聚类处理归纳出了79条非冗余单拷贝

3、序列。通过NCBI提供的在线BLAST程序，在蛋白水平和核酸水平找到61条序列的同源物。之后在dbEST数据库中登录了38条人参EST序列。对测通全长的26条单拷贝序列进行阅读框查找和蛋白质结构域分析后，对12条单拷贝序列进行了功能注释，并提交GcnBank登录。人参叶和根组织cDNA文库的成功构建，不仅保存了人参基因资源。获得的大量表达序列标签，扩充了人参基因数据资料，而且为人参中有明确功能的特异基因的克隆、表达以及新基因的克隆与功能研究奠定了物质基础。关键词：人参；cDNA文库；表达序列标签AbstractGinseng(Panaxginseng

4、C．A．Meyer)，consideredtobeoneofthemostpotentmedicinalplants．isusedintraditionalmedicine．ThereputedmedicinalandherbalqualitiesofGinsenghaveledtoitspopularity，primarilyintheOrient，butincreasinglyworldwide．Thevariouskindsofsecondarymetabolite，theactivecomponentsofGinseng，haveanobdo

5、琳regulatorybioaetiveeffectsoncentralnervoussysytem,cardiovascularsystem,alimentarysystem,endocrinesystem,inlmunesystemandSOon．Althoughmanyreportshavebeenpublishedreg盯dingthepharmacologicaleffectsofsecondarymetabolite，littleisknownaboutthegenesandbiochemicalpathwaysinsecondaryme

6、tabolitebiosynthesis．Inordertodelineatethesebiosynthesispathwaysandtheirregulationusingbiochemicalandmolecularbiologicaltechnique，andpreservethegenereSOurceinformationofGinseng,weconstructedfull—longtheDNAlibrariesofginsengleafandroottissues，andanalyzedpartialexpressedsequencet

7、ags．ThetotalRNAwasprepared、)I，itllTrizolreagentseparatelyfrom&year-oldginsengleafand4-year-oldginsengroottissues．Thefull—longthcDNAexpressionlibrarywasconstructedbySMARTtechnology．TheprimarytiteroftheeDNAlibraryofleafwas6．55x10’pillandtherateofrecombinantWas81％。theinsertsizeran

8、gedfrom0-3~2．5kb．Correspondingly，thatoftherootprimarye