小麦盐胁迫应答基因cDNA的克隆与序列分析

《小麦盐胁迫应答基因cDNA的克隆与序列分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、西北大学硕士学位论文小麦盐胁迫应答基因cDNA的克隆与序列分析姓名：龚莉桂申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：徐子勤20030501小麦盐胁追应答基因cDNA的克隆与序列分析摘要本研究以西农88小麦幼苗叶片为材料，利用DDRT—PcR(DifferentialDisDlavReverseTranscription—P01yTnerasechainReaction，差异显示反转录PcR)技术对在正常条件下与盐胁迫条件下小麦叶片基因表达的差异进行分析以期找到有价值的耐盐相关基因。从1％Nacl处理72h的小麦幼苗叶片提取纯化mRNA，经过锚定引物Oligo

2、(dT)12Gc反转录得到cDNA第一链，用10个碱基随机引物进行二次PcR扩增，经1．5％琼脂糖凝胶电泳检测到24条差异cDNA片段，包括9条诱导表达片段、2条增强片段和13条抑制表达片段。对12条差异较明显的cDNA片段进行了克隆，对其中的wSR2、WSRl、W蹄b三个克隆进行了序列测定和同源性对比分析。Northern印迹分析结果显示wSR2片段存在明显的胁迫抑制表达特征，即处理材料有较弱的杂交信号，未处理材料有较强的杂交信号。GenBank／BLAsT检索发现wsR2与编码木酮糖激酶(L—xyluloseKinase)的LyxK基因核甘酸序列有99

3、％相似性。wSR2与木酮糖激酶基因的高度同源性说明wsR2可能参与了光合作用中的暗反应过程，并在暗反应过程中起抑制作用，对它的克隆和表达分析为认识植物磷酸戊糖途径和光合作用的暗反应过程提供了新的证据。wSRl与wSR3探针与盐胁迫条件下培养的小麦叶片RNA杂交时均表现出阳性杂交信号，而无盐胁迫时没有杂交信号。wSRl与人血管生成素抑制因子编码序列具有高度同源性，推测wsRl对应基因的编码产物可能作为一种RNA酶抑制因子起作用，通过保护某些RNA分子来调节翻译过程，使小麦细胞对盐胁迫做出防御性应答。小麦wsRl片段与人和动物血管生成素抑制因子编码序列的高度一

4、致性表明它们可能是生命演化过程中出现最早的基因，反映出动植物细胞在抵抗逆境方面具有一些共同的机制。wSIu与^b珊D蹰p把珊BACcloneRPll-399D2(肋m4，complctesequence)的一段核甘酸序列同源性高达100％，进一步说明植物与动物基因组具有某些共同的编码序列，可能在基因表达方面具有一些共同的机制，wSR3序列可能是动植物生命演化过程中的保守序列。小麦盐胁迫应答基因cDNA片段的获得，为进一步认识理解盐胁迫应答机理提供了新证据。关键词：小麦盐胁迫差异显示反转录PCR总RNANonhem杂交LyxK基因血管生成素抑制因子人类4号染

5、色体RPll．399D2BAcCloningandsequenceanalysesofcDNAfragmemtsencodingsalt—respondinggenesf}omwheatAbstractTheobjectofthisStudyislookjngforthesalt—respondinggenes舶mtlleleavesofwheat(xinong88)seedlingsgro、Ⅳinginnollnalorsalt．蚰ressconditionsbyDi行efe埘alDisplayRT．PCR(DDRT-PCR)methodrr瓜NAs啪s

6、isolatcda11dp砸fied舶mleavesofwheatseedlin笋仃eated谢th1％NaClfor72hollrs．Thefirststra堇ldofcDNAwassynthesizedViareVersetranscriptiOnwithanchorprimer0ligo(dT)12GC．PCR锄plificationwascarriedout谢th10bp姗domprimersfortwotimes，andtherc—amplifredp州uctswereseparatedin1．5％agamsegel．T1矾

7、ntyfbIlrdi

8、仃eremialcDNA施gmems，includiIlgIlineinductiVeexpression触gmems，铆ojntensjve觎gmentsa11dthjrf。eni】111ibito叮exl)ression胁gmcntsweredetectcd．T、velvccDNA胁gmems谢thobviousdi肫rencewerecloned．Sequence锄alysesandh哪01090uscomp撕sonsofWSR2、WSRl、WSR3werecarriedout．ThefcsultofNonllemblo砸ngexhibitedt胁W

9、SR2劬grnemhadobviollssaltiIl}libit