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1、梅花鹿Ghrelin全长cDNA克隆及其序列分析张曼金鑫田巧珍刘骄王云鹤杨银凤内蒙古农业大学兽医学院摘要：为获得梅花鹿GhrelincDNA全序列，以梅花鹿皱胃黏膜上皮组织提取的总RNA为模板，通过RT-PCR和RACE法克隆了梅花鹿皱胃中Ghrelin基因cDNA的全序列。结果表明梅花鹿GhrelincDNA序列全长为539bp,其中5'非翻译区(5‘UTR)为46bp,3'UTR为128bp,开放阅读框(ORF)为351bp,该ORF编码116个氨基酸残基。将梅花鹿Ghrelin基因的cDNA与人和其他动物的
2、Ghrelin相比，发现:梅花鹿Ghrelin与驯鹿、山羊、绵羊和牛的同源性达90.4%99.1%;与恒河猴、人、猪、犬的同源性达76.6%66.9%;与鸡和野鸽的同源性分别为36.4%和35.4%o研究表明Ghrelin的结构具有明显的种属特界性，因此Ghrelin在反刍动物体内可能有着重要的生理功能。关键词：梅花鹿;Ghrelin;cDNA克隆;同源性分析;作者简介：张曼，博士研究生，E-ina订:zhangman90514@163.com作者简介：杨银凤，博士，教授，主要从事动物解剖组织学和分子生物学研究,
3、E-mail:juliel963@163.com收稿日期：2016-10-26基金：内蒙古自然科学基金资助项冃(2013MS0408)Full-lengthcDNAsequencecloningandanalysisofGhrelininCervusnipponZHANGManJINXinTIANQiaozhenLIUJiaoWANGYunheYANGYinfengCollegeofVeterinaryMedicine,InnerMongoliaAgriculturalUniversity;Abstract：In
4、ordertoobtainthefull-lengthcDNAofGhrclininCorvusnippon,RT-PCRandRACEmethodswereusedbyusingtotalRNAofabomasustissueinC.nipponastemplate.Theresultsofsequenceanalysisrevealeda539bplengthcDNAcontaining46bp5’-untranslatedregion(5‘UTR),128bp3’-untranslatedregion(3‘
5、UTR)and351bpopenreadingframe(ORF)cncoding116einiinoacids-ThecDNAscqucnccalignmcntsofC.nipponGhrclingenewithhumanandotheranimalsshowedthatthecDNAsequencehomologyofC.nipponGhrelinwas90.4%-99.1%toreindeer,goat,sheepandcattle,66.9%-76.6%withrhesusmonkey,human,pig
6、anddog,only36.4%withchickenandC.1ivia.TheseresultsindicatedthatthestruetureofGhrelindisplayedanobviousvarietalspecificity,suggestingthatGhrclinmightpldyanimportantphysiologicalfunctionroleinruminants.Keyword：Cervusnippon;Ghrelin;cDNAclone;homologyanalysis;Rec
7、eived：2016-10-26梅花鹿(Cervusnippon)属偶蹄目、鹿科、鹿属，是东亚季风区特有鹿类，被世界自然保护联盟(IUCN)列为瀕危物种，也是我国国家I级重点保护动物。梅花鹿全身是宝，它的茸、鞭、血、肉、胎、脂、筋、尾、角、骨、皮等，均有药用价值，是木草纲目可供药用的名贵中药山。Kojima等及1从鼠胃中提取出一种可以激活G蛋白藕联受体一生长激素促分泌素受体(Growthhormonesecretagoguereceptor,G1IS-R)并可促进生长激素(Growthhormone,GII)分泌
8、的多肽。这种GHS-R的内源性配体被称为Ghrclino纯化后的Ghrclin是一个含有28个氨基酸残基的多肽，其mRNA主要存在于胃底腺的颈部和底部，但在动物的下丘脑、垂体、脑干、胰腺、肌肉、肠、肾、心、肺、胎盘和性腺中也有表达［3-5］。Ghrelin除了具有调节GH的释放，还能够增加食欲、促进胃肠蠕动、调节体质量、治疗肠道疾病和愈合辐射引起的伤口等作用归1。目前，大
