柞蚕新型抗菌肽moricin基因的克隆与分析.pdf

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1、第43卷第3期河南大学学报(自然科学版)Vo1．43No．32013年5月JournalofHenanUniversity(NaturalScience)Mav2013柞蚕新型抗菌肽moricin基因的克隆与分析汪延生～，宋雪艳，廖富蒴H，林健荣，赵亚华，钟杨生，李文楚(1．华南农业大学动物科学学院，广州510642；2．广州呼吸疾病研究所广州医学院附属医院广州医学院，广州510230)摘要：根据已知的抗菌肽moricin核苷酸和氨基酸序列设计兼并引物，利用PCR方法克隆得到柞蚕新型抗菌肽moricin．该序列长度为1

2、26bp，将该序列克隆到pUCm-T载体．通过测序鉴定了柞蚕moricin的核苷酸序列，其核苷酸序列与家蚕moricinII的相似性为99．21．根据核苷酸序列推算的柞蚕氨基酸序列与家蚕moricinII和mori—tinI的相似性分别为97．62和95．24．无论柞蚕moricin的核苷酸还是氨基酸序列都与家蚕moricin相似，说明它们属于同一抗菌肽家族，柞蚕核苷酸序列已在美国国立生物技术信息中心登录，登录号为DQ5194oo．关键词：柞蚕；抗菌肽；moricin；基因克隆中图分类号：Q96；Q78文献标志码：A文

3、章编号：1003—4978(2013)03—0301—05CloningandAnalysisofNovelTypeofAntibacterialPeptideMoricinfromAnthereapernyiWANGYansheng一，SONGXueyan，LIAOFupin，LINJianrong，ZHAOYahua，ZHONGYangsheng，LIWenchu(1．CollegeofAnimalScience，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，Ch

4、ina；2，GuangzhouInstituteofRespiratoryDisease。theFirstAfliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege，Guangzhou510230。China)Abstract：Toobtainmoricinfromanthereapernyi，PCRwasperformed．Degenerateprimersweredesignedbasedontheconservedaminoacidsequencesofmoricin．A126bpcDNA

5、fragmentwasobtainedfromAnthereapernyi，whichencodesapeptideof43aminoacidresidues，andwasclonedintopUCm—Tvector．Thenucleotidesequenceofthemoricinwasconfirmedbysequencing．NucleotidesequencesofAnthereapernyimoricinshowed99．21homologywithBombyxmorimoricinII．thededuced

6、aminoacidsequenceshowed97．62and95．24homologywithBombyxraorimoricinIIandmoricinI．NotonlynucleotidesequencesbutalsoaminoacidsequenceofmoricinfromAnthereapernyilikethatofmoriciinfromBombyxmori，confirmingthatmoricinfromanthereapernyiisanewmoricinlikeantibacterialpep

7、tide．ThissequencewasdepositedinnationalcenterforbiotechnologyinformationGenBankwiththeAeeessionNo．DQ519400．Keywords：Anthereapernyiantibacterialpeptide；moricin；genecloning昆虫本身不具备后天适应性的免疫系统，但是自身可以产生多种抗微生物蛋白质或肽，这些抗微生物蛋白质或肽在昆虫防御外来侵入的病原物中占有极其重要的位置[1]．抗菌肽作为一个较大的抗菌蛋白家族

8、，具有一些共同的特征，比如热稳定性、低分子量、带有正电荷，并且这些抗菌肽都可以由创伤或微生物病原菌诱导产生]．抗菌肽根据它们的氨基酸序列和抗菌活性可以分为六类：天蚕素类、富含Pro残基的多肽类、富含Gly残基的多肽类、防御素、末端开环多肽和溶菌酶[7]．抗菌肽moricin是日本科学家Haral8等首先从家蚕(Bombyxmori