抗菌肽基因克隆.ppt

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1、抗菌肽基因研究Drosomycin基因Drosomycin-like基因Hemolin基因一.Drosomycin基因Drosomycin（Drs）isaninducibleantifungaldefensinwith70residuesinitiallyisolatedfromtheDrosophilamelanogasterhaemolymph.根据结构功能不同分类天蚕素（cecropin）富含Gly的抗菌肽昆虫防御素富含Cys的抗菌肽死亡素富含Pro的抗菌肽昆虫抗菌肽Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇（Drosophi

2、lamelanogaster）中鉴定发现的对丝状真菌（又叫霉菌）有广谱抗性的抗真菌肽因子。研究Drs基因的意义昆虫抗真菌肽在农业、医药方面具有巨大的开发前景,可望开发为具有广谱抗性的新型抗真菌生物制剂。可作为新发现和鉴定的昆虫抗真菌肽基因的比较研究对象,同时也可用于今后定点诱变修饰和生物技术开发研究。因为密码子存在摇摆性，使得不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。利用NCBI搜索不同物种中该基因的cDNA编码的氨基酸序列来设计简并引物。注意：1.简并引物不是一对引物，是一类由多种寡聚核苷组成的混合

3、物，彼此之间有一个或数个核苷酸的差异，是根据氨基酸推演而来。2.设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域，且两个保守区域相距50~400个氨基酸为宜，使得PCR产物在150~1200bp之间，最重要的是每一个保守区域至少有6个氨基酸，因为每条引物至少18bp左右。Drs基因在以下物种中均有发现DrosophilamelanogasterDrosophilasimulansDrosophilatriaurariaMuscadomesticaHomosapiens上游引物：5'GAYUGYYUNAGYGGNCGN3'下游引物：5'YG

4、UNGGRAGYGUGGUYGU3'注：R代表AorGY代表CorTN代表GorAorTorC二.Drosomycin-like基因2001年，Daibo从叔白颜果蝇（Drosophilatriauraria)中鉴定发现了Drosomycin-like，它们具有与Drosomycin相同的保守位点。三.Hemolin基因Hemolin,amemberoftheimmunoglobulinsuperfamily,wasfirstdescribedfromthehemolymphofdiapausingpupaeofHyalophora

5、cecropia.Hemolinispresentatlowlevelsinnaïvehaemolymphbutisupregulatedinresponsetobacterialchallenge.实验思路根据已报道的Drosomycin基因、Drosomycin-like基因和Hemolin基因的保守氨基酸序列分别设计简并引物，以葱蝇滞育期的cDNA为模板,分别通过PCR扩增保守序列,再进一步通过RACE扩增3′和5′端序列,以期望得到这三个基因的全长cDNA序列。当前工作内容学习根据保守氨基酸序列设计简并引物学习饲养技术学习和

6、研究发育的过程致谢谢谢大家！