日本囊对虾中抗菌肽分子基因克隆及功能分析

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1、分类号７８：Ｑ单位代码：１０４２２密级：学号；２０１０１１４２７博±学位论文Ｄｉｓｓｅ＾ａｔｉｏｎｆｏｒＤｏｃｔｏｒａｌＤｅｒｅｅｇ日本襄对軒、中抗菌论文题ｆｌ＊分子基Ｓ克隆及功能分丰斤目：Ｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏ凸ｓＵｉｄｏｆａｎｔ化ａｃ化ｒｉａｌｐｙ．ｐｅｔｉｄｅｉｎＡｆ口幻ｅｗｓ口ｐｏｎｚｃＭＳｐｙ作者姓名姜海姗培养单位生命科学学院专业名称动物学指导教师王金星教授合作导师２０１５年５月２０

2、日ＫｍＫＭＭｋ分类号：０４２２；单位代码１Ｑ７８密级：学号：２０１０１１４２７静ｉ、化博±学位论文Ｄｉｓｓｅ＾ａｔｉｏｎｆｏｒＤｏｃｔｏｒａｌＤｅｒｅｅｇ论文题目；日本囊对邮中抗菌化分子基因克隆及功能分析Ｔｉｔｌｅ：ＥｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｓｔｕｄｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｙｅｔｉｄｅｓｉｎＭａｒｓｕｅｎａｅｕｓａｏｎｉｃｕｓｐｐｐｊｐ作者姓名姜海姗培养单位生命科学学院专业名称司］物学指导

3、教师王金星教授合作导师２０１５年５月２０日原创性声明：本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。餘文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名病如＾日期：沁关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有

4、关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅山东大学可Ｗ将本学位论；本人授权文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或其他复剌手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定（））：导师签名：日期：Ｘ论文作者签名ＩＩ．Ｗｄ山东大学憐±学位论文目录ｍｍ；ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＩｌｌ符号说明ＶＩＩ一第部分综述无脊椎动物先天免疫１一、免疫系统概述１、１１先天免疫２、适应性免疫１二、无

5、脊椎动物先天免疫２１、细胞免疫２２、体液免疫２Ｈ、甲壳动物中抗菌狀研究概述３１、对邮素（Ｐｅｎａｅｉｄｉｎ）４２、溶茜酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅｓ）４３、含ＷＡＰ结构域蛋白（ｃｒｕｓｔｉｎ）４４－、抗月ｎ多糖因子（ａｎｔｉｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅｆａｃｔｏｒｓ）６四、本硏巧目的和意义１０第二部分日本囊对邮中抗菌狀性质与功能研究１３第一章含单乳清酸性蛋白结构域的甲壳肤具有抑制细菌对日本囊对邮侵染的功能１３一、前言１３

6、二、４材料方法１Ｌ側１４１４１丄实验材料２１．．谱株和载体１４５１．３．仪器和试剂１２、施１５２丄日本囊对奸免疫刺激及血细胞的分离１５２．２５．ｍＲＮＡ提取１一２Ａ第１６．３．ｃＤＮ链合成２．４．序列分析１６２－．５．半定量ＲＴＰＣ民１７６－１２．炎光定量ＲＴＰＣ民７．２．７．１重绍表达７１山东大学睹±学位论文２．８．丝氨酸蛋白酶抑制活性２１－２．９．ｒ场ＳＷＤ的抑制动力学２２’２．１０

7、．ｒＡ＾ＳＷＤ的理化性质２２２．Ｈ细菌结合实验２３２．１２．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ２４’２ｒ．２４．１３．场ＳＷＤ抑制细菌分泌蛋白酶活性．．２．１４．弧菌自然感染对邮２４Ｈ、结果２５１．序列分析２５２２６．系统发生树的构建’３．ＭｙＳＷＤ在各沮织中的分布及受病原刺激后表达变化２８４．重组蛋白表达与纯化２９５．ｒＡ巧ＳＷＤ抑制蛋白酶活性和抑制动力学巧６．ｒＷＳＷＤ的理化性质３１７．ｒＡ＜／ＳＷＤ通过结合细菌表面的多

8、糖具符结合细苗活性３１８．ｒＭＳＷＤ抑制细销分泌的蛋白酶活性／３２’９．ｒＡ々ＳＷＤ保护邮体不受细茜感染３３四、讨论３４第二章日本囊对邮中抗脂多糖因子具有抗菌巧性３７—、前言３７二、３８材料方法３８１．蘭株和载体２．仪器和试剂別３．实验材料３９４．施３９４丄日本囊对邮免疫刺激及血细胞的分离３９４２ｍＲＮＡ．．提取３９４．３．ｃＤＮＡ第链合成３９４．４．序列分析巧４－．５．