淇河鲫抗菌肽hepcidin基因的克隆及其表达分析

《淇河鲫抗菌肽hepcidin基因的克隆及其表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、单位代码10476学号1204180307分类号Q17硕士学位论文淇河鲫抗菌肽基因的克隆及其表达分析学科、专业：水生生物学研究方向：水产动物医学申请学位类别：理学硕士申请人：马龙洋指导教师：孔祥会教授二〇一五年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河南师范大学或其他教肓机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

2、作者签名:日期：^(n关于论文使用授权的说明本人完全了解河南师范大学有关保留、使用学位论文的规定，目卩：有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河南师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）作者签名:MOLECULARCLONINGANDEXPRESSIONANALYSISOFANTIBACTERIALPEPTIDEHEPCIDINGENEINQIHECRUCIANCARPCARASS

3、IUSAURATUSADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNornalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByMaLongyangSupervisor：Prof.KongXianghuiMay，2015摘要抗菌肽是由生物细胞特定基因编码，经过外界条件诱导产生的一类具有广谱杀菌活性作用的多肽。近年来发现的新型抗菌肽hepcidin，在鱼类中广泛存在，主要是由生物体肝脏特

4、异性表达的一种阳离子小分子多肽。可以抑制多种病毒、细菌、真菌和原生动物的生长繁殖，在鱼类非特异性免疫中起重要作用，同时也可以作为一种信号分子，参与机体铁代谢。本研究根据GenBank登录的已知鱼类抗菌肽hepcidin基因的保守区设计简并引物，采用RT-PCR结合RACE的方法获得淇河鲫(QihecruciancarpCarassiusauratus)hepcidin基因全长cDNA序列，并对基因序列及其编码的多肽进行了结构和系统进化分析。得到淇河鲫hepcidincDNA全长708bp，包含开放阅读框(ORF)258bp，5′非翻译区(

5、5′-UTR）94bp和3′非翻译区（3′-UTR）356bp，其中3′-UTR存在1个多聚腺苷酸加尾信号(AATAAA)和2个mRNA不稳定基序(ATTTA）。开放阅读框编码一个85个氨基酸的成熟肽前体，由信号肽（24个氨基酸残基）、前体肽（36个氨基酸残基）和成熟肽（25个氨基酸残基）3部分序列组成。成熟肽含有8个保守的半胱氨酸残基，通过4个链内二硫键形成单一发卡结构，拐角处有一个特殊的二硫键，可能与hepcidin的抗菌活性直接相关。序列分析表明，与已报道的其他鱼类hepcidin相比较，核苷酸序列具有很高的序列相似性，翻译的成熟肽

6、与其他种类生物的成熟肽进行系统进化分析，结果显示与报道的其他鱼类hepcidin具有较高的同源性，且与鲤鱼的亲缘关系最近，而与哺乳类和两栖类在不同的分支上。采用RT-qPCR的方法检测淇河鲫不同组织hepcidinmRNA表达水平，以及腹腔注射嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)和脂多糖（LPS）后各组织的表达变化，结果显示在正常淇河鲫中，肝脏中hepcidinmRNA表达水平最高，其次为脾脏和头肾，在鳃和肾中的水平较低，而在心脏、肠、肌肉、脑和血液中mRNA的表达量则更少。淇河鲫经过嗜水气单胞菌注射和LPS刺激后，选取

7、hepcidinmRNA表达量较高的五种组织（鳃，肾脏、脾脏、肝脏、头肾）检测表达的时序变化。结果显示整体水平呈先升高再下降的趋势，但不同组织的表达模式也有不同。注射LPS的鱼体中，头肾、肾脏和脾脏hepcidinmRNA水平在刺激后6h达到最大值，可达到对照组水平的100多倍；I鳃中hepcidinmRNA水平在刺激后12h达到最大值，约为对照组水平的60倍；肝脏hepcidinmRNA水平在刺激后3h开始上升，到24h才达到最高，约为对照组的30倍，之后慢慢回落。注射嗜水气单胞菌的鱼体中，脾脏在6h达到最高，hepcidinmRNA水

8、平约为对照组的150倍；鳃、肾脏、头肾在12h达到最高，鳃和肾hepcidinmRNA水平约为对照组的80倍，头肾为150倍；肝脏在24h达到最高，约为对照组hepcidinmRNA水平的18