柞蚕丝氨酸蛋白酶基因ApSPl3的克隆及序列与表达分析.pdf

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1、Scienceof5ericulture?．。■雷鼬薯■＼2014，40(2)：0235-0240ISSN0257—4799；CN32一I115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．cn柞蚕丝氨酸蛋白酶基因ApSP13的克隆及序列与表达分析王晓惠黄伶姜义仁王勇钟亮文竹秦利(沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁省昆虫资源工程技术研究中心，沈阳农业大学柞蚕研究所，沈阳110866)摘要丝氨酸蛋白酶在昆虫的多种生理生化过程中起重要作用。为了解柞蚕体内丝氨酸蛋白酶的分子特性及功能，克隆得到一个编码柞蚕丝氨酸蛋白酶基因的cDNA序列，命名为ApSP13

2、(GenBank登录号：KF039687)。该基因的开放阅读框(ORF)长855bp，编码284个氨基酸，蛋白质分子质量为29．59kD，等电点(pI)为9．37。ApSP13的信号肽序列包含16个氨基酸残基，具有组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)催化中心，在成熟蛋白质中由6个保守的半胱氨酸残基组成3对二硫键，对维持蛋白质的三级结构起重要作用。将ApSP13氨基酸序列与其它昆虫的同源序列进行比对，结果与蓓带夜蛾(Mamestraconfigurata)的同源氨基酸序列相似度最高，达到67％。半定量RT—PCR检测表明，ApSP13在柞蚕4个发育

3、阶段和5龄4d幼虫各组织中均有表达，其中在幼虫期及5龄幼虫脂肪体中的表达水平最高。推测ApSP13可能在柞蚕的免疫及蛋白质消化吸收过程中发挥作用。关键词柞蚕；丝氨酸蛋白酶；基因克隆；序列特征；表达谱中图分类号$885；Q785文献标识码A文章编号0257—4799(2014)02—0235—06Cloning．●SequenceandEI=xpPressionAna。lysesoftAntheraeapernyl。SerineProteaseGeneApSP13WANGXiao—HuiHUANGLingJIANGYi-RenWANGYongZHONGLiangWE

4、NZhuQINLi(CollegeofBioscienceandBiotechnology，LiaoningEngineeringandTechnologyResearchCenterforInsectResources，ResearchInstituteforTussah，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang110866，China)AbstractSerineproteasesplayanimportantroleinvariousphysiologicalandbiochemicalprocessesofinsect

5、s．Toclari—fYthemolecularcharacteristicsandfunctionsofserineproteasesinAntheraeapernyi．afull—lengthcDNAsequenceenco—dingserineproteaseinAntheraeapernyiwasclonedandnamedasApSP13(GenBankNo．KF039687)．Sequenceanal—ysisindicatedthatApSP13includesan855bpopenreadingframe(ORF)，whichencodes284a

6、minoacidswithpredic—tedproteinmolecularmassof29．59kDandPIof9．37．ApSP13hasa16一amino—acidsignalpeptide．acatalyticactivecentercomposedofhistidine．asparticacidandserine．andsixconservativecysteinesthatfOrmthreepairsofdisulfidebondswhichplayacrucialroleinmaintainingitstertiarystructure．Amin

7、oacidsequencealignmentshowedthatApSP13sharedsignificantsimilaritytohomologousserineproteas—收稿日期：2013—10-26接受日期：2013-11-23esofotherinsects，withthehighestidentity(67％)to资助项目：现代农业产业技术体系建设专项(No．CARS一22)，沈阳市Mamestraconfigurata．RT—PCRanalysisindicatedthat发改委科研项目(No．2011154)，沈阳农业大学国家自然ApS户13

8、wasex