柞蚕模式识别受体βGRP的基因克隆及序列特征和诱导表达谱分析.pdf

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1、5CienceofSericulture2012，38(3)：0449—0455ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．on柞蚕模式识别受体13GRP的基因克隆及序列特征和诱导表达谱分析李凤娟姜德富李喜升王凤成李文利(大连理工大学生命科学与技术学院，~T；klg116023；。辽宁省蚕业科学研究所，辽宁凤城118100)摘要在昆虫的免疫防御系统中，模式识别受体介导的免疫反应起着主导性作用。采用RACE方"；Z-L隆了柞蚕的模式识别受体——p一1，3-葡聚糖识别蛋白的基因ApflGRP(G

2、enBank登录号：JN880424)。序列分析表明：ApflGRP含有1470bp的开放阅读框，编码490个氨基酸；Ap[3GRP属于分泌型蛋白质，N端有17个氨基酸组成的信号肽，具有13GRP保守性的糖苷水解酶活性结构域(Glyco—hydro一16)。系统进化分析显示Apl3GRP与家蚕的pGRP一3属于同一个分支，序列相似度为71％。利用实时定量PCR方法检测柞蚕蛹经4种微生物(革兰阳性菌Bacillussubtilis、革兰阴性菌EscherichiⅡc0liTop10、病毒Antherne0pernyinucleopolyhedrovirus

3、、真菌SaccharomycescerevisiaeW303—1A)诱导处理后，ApBGRP在蛹体表皮、脂肪体和血淋巴中均明显上调表达，但在生殖腺内的表达则无明显变化，该基因在中肠内仅被革兰阳性菌及真菌诱导上调表达，并且该基因对真菌的应答表达最显著，显示ApflGRP经不同微生物诱导后的表达水平以及在蛹体不同组织中的表达水平有明显差异。推测Ap[3GRP因具有糖苷水解酶活性结构域能水解病原体的多糖，所以可以通过与微生物表面相关分子模式的结合而识别多种微生物，并调控相关的免疫通路，在柞蚕免疫系统中发挥作用。关键词柞蚕；3-葡聚糖识别蛋白；序列特征；表达模式

4、；微生物诱导中图分类号$885．1；Q78文献标识码A文章编号0257—4799(2012)03—0449—07Cloning，SequenceFeatureandInducedExpressionProfileofPat-ternRecognitionReceptorI~GRPofAntheraeapernyiLIFeng—JuanJIANGDe—FuLIXi—ShengWANGFeng—ChengLIWen—Li’(SchoolofLifeScienceandB~technology，DalianUniversityofTechnology，Dal~

5、nL~oning116023，China；SericulturalResearchInstituteofL~oningPrownce，FengchengLiaoning118100，China)AbstractJmmunoreactionmediatedbypatternrecognitionreceptorsplaysapredominantroleinjnsect；mmunedefensesystem．Inthispaper，weclonedtheAntheraeaper几patternrecognitionreceptorprotein(p一1，3

6、一glucanrecognitionprotein)geneAp~GRP(GenBankaccessionNo．JN880424)byRACEtechnology．SequenceanalysisindicatedthatApf3GRPhasanopenreadingframeof1470bpandcodesfor490aminoacids．API~GRPisasecretedproteinwithasignalpeptideconsistingof17aminoacidsattheN—terminusandcontainsaconservativepG

7、RPdomainwithglycosidichydrolaseactivity(Glyco—hydro一16)．PhylogeneticanalysisshowedthatAppGBPandBombyxmoripGBP-3belongedtothesameclade．andhadasequenceidentityof71％．Real—timequantitativePCRwasconductedtodetecttheexpressionpa~ernofAp#GRPfndifferentlissuesofsilkwormafterinfectionby4d

8、ifferentmicroorganisms．namelyGram—positi