乳酸乳球菌Nisin抗性基因的异源性表达和活性研究.pdf

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1、实验与检验医学2014年8月第32卷第4期ExpefimentalandLaboratorvMedicin垒12Q!：：·381··论著·乳酸乳球菌Nisin抗性基因的异源性表达和活性研究杨洁，贺松(成都大学附属医院，四川成都610081)摘要：目的评估乳酸乳球菌Nisin抗性基因在德氏乳杆菌保加利亚亚种的表达活性．为建立食品级筛选标记做准备。方法将新鲜牛奶接种于含有4001xg／ml乳酸链球菌素的M17平板上，在分离的菌株中筛选乳酸乳球菌．同时提取其基因组DNA和质粒DNA．根据已公布的Nisin抗性基因序列设计一对引物．以提取的基因组DNA和质粒DNA为模板进行PC

2、R扩增。产物进行电泳分析。将目的基因插入到大肠杆菌乳杆菌穿梭质~-pMG36e中．并在德式乳杆菌保加利亚亚种中观察目的基因的表达活性及其作为筛选标记的活性。结果成功筛选出对Nisin具有抗性的乳酸乳球菌．进行目的基因扩增后成功将目的基因转化到L6032中。并表达出Nisin抗性。结论在德式乳杆菌保加利亚亚种中成功克隆及表达出Ni8in抗性基因关键词：乳酸乳球菌；德式乳杆菌保加利亚亚种；Nisin抗性基因；食品级筛选标记中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1674—1129(2014104—0381—05DoI：10．3969／j．issn．1674—1129．2

3、014．04．006HeterologousexpressionandactivityresearchofanisinresistancegeneinLactobacillusdelbrueckiisubspbulgaricnsYANGJie，HESong．TheAfiliatedHospitalofChengduUn&ersity,Chengdu610081，Chinc~Abstract：ObjectiveToevaluatetheactivityofnisinresistancegenefnsr)intransformantLactobacillusdelbruec

4、kiisubsp．bulgaricus，andprepareforestablishingafood—gradeselectivemarkeLMethodsInoculatedfreshmilkinM17brothcontaining400~mlnisinandincubatedat30℃for16h．Thenpickedoutthesuspectedcolonies．andextractedgenomicDNAandplasmidDNA．Basedonthensrgenesequenceinformation，PCRamplificationwasperformedw

5、ithgenomicDNAorplasmidDNA，elec—trophoretieanalysiswasusedtoanalyzetheproducts．ThetargetgenewasinsertedintopMG36e，andrecombinantplasmidpMG36e—nsrwastransformedintoLactobacillusdelbrueckiisubsp．bulgaricus(L60321competentcells．ResultsSixnisinresistantstainswereidentifiedasLactococcuslactis．

6、ThetargetgenewasclonedintoEcoli—LactobacillusshuttlevectorpMG36e．TheNisinresistibilitywasobtainedwhentherecombinantplasmidpMG36e—nsrwastransformedintoLactobacillusdelbrueckiisubsp．bulgaricusL6032competentcells．ConclusionsThensrgenewassuccessfullyclonedandexpressedinLactobacillusdelbrueck

7、iisubsp．bulgaricusL6032．Keywords：Lactocoecuslactis；LactobaciUusdelbrueckitsubsp．bulgaricus；Nisinresistancegene(ns~；Food—grade．乳酸链球菌素fNisin)是乳酸链球菌产生的一加0．03～0．05g／kgNisin就可抑制芽孢杆菌和梭状种多肽物质．由34个氨基酸残基组成【11。食用后在芽孢杆菌孢子的发芽和繁殖。Nisin的抑菌机制为：人体的生理PH条件和仪一胰凝乳蛋白酶作用下很吸附于敏感菌的细胞膜上．其C末端侵入膜内形