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《乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、47卷4期微生物学报47(4):604～6092007年8月4日ActaMicrobiologicaSinica4August2007乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达11311,2徐波,曹郁生,陈燕,郭兴华(1食品科学教育部重点实验室南昌大学中德联合研究院南昌330047)(2中国科学院微生物研究所北京100080)摘要:以α2aga基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞壁锚定表达系统,并用这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprFPH。首先以pRAF800和
2、pNZ8048构建了含有α2aga、PnisA2MCS2TpepN和θ复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体pRNA48,再以pRNA48和pVE5524为出发载体构建了含有α2aga、PnisA2SPUsp452nucA2CWAM62t1t2和θ复制子的乳酸乳球菌细胞壁锚定诱导表达载体pRNV48。然后以食品级载体pRNA48和pRNV48为基础,构建了不含抗生素抗性选择标记的铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因的表达质粒pRNA482OprFPH和pRNV482OprFPH。利用nisin进行重组乳酸乳球菌菌株的
3、诱导表达,通过SDS2PAGE和Westernblot分析,检测到表达蛋白分别占细胞内可溶蛋白的916%和细胞壁锚定蛋白的918%,表达产物具有免疫原性,可与含OprFPH的乳球菌以及铜绿假单胞菌发生特异性的凝集反应。关键词:乳酸乳球菌;食品级载体;诱导表达系统;融合外膜蛋白中图分类号:Q786;Q93文献标识码:A文章编号:000126209(2007)0420604206乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)广泛存在于自是可控制的蛋白质生产的理想的系统,其应用前景[5,6]然界,是人和动物正常
4、菌群的主要成员,因其重要的十分广阔。生理功能和公认的安全性,在医药和食品工业中有铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)是一种着广泛的应用。随着分子生物学的发展,乳酸菌的重要的常见的条件致病菌,是医院内感染的主要病功能和应用得到进一步开拓。乳酸菌的分子修饰和原。铜绿假单胞菌的外膜蛋白(outermembrane改造需要适于食品和医药要求的遗传元件,包括载protein,Oprs)在物质的跨膜转输中起着重要的作用,体、选择标记和信号序列等。这意味着用于构建重也是重要的抗原成分,近年来有许多利用外膜
5、蛋白组子的所有基因成分应当来自安全的微生物,由于组分如OprF,OprI或其融合蛋白制备疫苗的研究,食品用的乳酸菌、酵母等一般认为是安全的并在应用中取得了可信的结果。在以前的工作中,[1～4](generallyregardedassafe,GRAS),因而受到广泛本实验室构建了铜绿假单胞菌OprFPH融合基因和地注意。研究与开发乳酸菌食品级载体2受体系统,表达质粒pGEX2OprFPH,用E1coli成功地表达了探索重要基因在乳酸菌中的克隆表达已成为乳酸菌OprFPH,并对重组融合蛋白的免疫原性以及免疫保[7,
6、8]分子生物学研究的热点,这对于食品与发酵工业将护性进行了初步研究。本研究中以α2aga基因是一个创新和推动。为食品级选择标记,构建乳酸乳球菌食品级高效诱乳酸菌食品级高效表达系统NICE(thenisin2导细胞内表达和细胞锚定表达系统,利用该系统对controlledexpression,NICE)系统是一个乳酸菌中应用铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprFPH进行了表广、可控性强的表达系统,它是在乳链菌肽(nisin)达,并对表达蛋白的免疫原性进行了初步研究。诱导下由nisA启动子控制目的基因表达的,含nisR
7、1材料和方法和nisK的两组分调节系统的高效诱导表达系统。该系统在加入诱导物2乳链菌肽后其诱导效率可达111材料1000倍以上。由于NICE系统的诱导剂、宿主菌和11111主要试剂和仪器:DNA限制性内切酶购自载体都是食品级的,具有良好的安全性,因此该系统TaKaRa公司;T4DNA连接酶、CIAP、PCR产物纯化基金项目:江西省自然科学基金(0330044)3通讯作者。Tel:86279128327754;Fax:86279128333708;E2mail:yyssccc@hotmail.com作者简介:徐波(
8、1970-),男,江西南昌人,博士,研究方向为食品生物技术。E2mail:xubo583@sohu.com收稿日期:2006212229;接受日期:2007203222;修回日期:2007205224徐波等:乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达.P微生物学报(2007)47(4)605试剂盒购自Promega公司;质粒提取试剂盒、DNA回113食品级表达载体
