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《表达猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸乳球菌的构建及.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、!"卷#期微生物学报!（"#）：%!$&%!!#$$"年!月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!’()*+#$$"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!表达猪传染性胃肠炎病毒!基因的重组乳酸乳球菌的构建及免疫原性分析唐丽杰，欧笛，葛俊伟，徐义刚，李一经"（东北农业大学动物医学院哈尔滨,2$$%$）摘要：根据猪传染性胃肠炎病毒纤突（B）蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行CDE扩增，获得含有-F
2、4GB基因!个主要抗原位点的约#$$$H(的目的片段，将其与分泌表达的载体质粒(IJ/,,#进行连接，通过电击转化进入宿主菌乳酸乳球菌IJ3$$$细胞内，在乳链菌肽（I*K*9）的诱导下进行表达，通过BLB1C’F4和M.KA.)9H+=A分析，表明-F4GB蛋白在乳酸乳球菌中获得表达，所表达的-F4GB蛋白具有与-F4病毒一样的抗原特异性。间接免疫荧光试验表明重组菌表达蛋白定位于菌体表面。将表达-F4GB蛋白的重组乳酸乳球菌及空质粒菌株分别口服免疫N’ONP?小鼠，收集粪便样品进行抗体检测，结果表明分泌型的重组菌(IJ/
3、,,#1B6PIJ3$$$免疫小鼠能够产生明显的抗-F4GKQ:’抗体。关键词：-F4GB蛋白；乳酸乳球菌；表面表达；免疫原性分析中图分类号：R3%%文献标识码：’文章编号：$$$,10#$3（#$$"）$#1$%!$1$2猪传染性胃肠炎（-)69K5*KK*H+.:6KA)=.9A.)*A*K，本研究以-F4G起主要免疫保护作用的囊膜蛋白基-F4）是由冠状病毒科猪传染性胃肠炎病毒因（B基因）主要抗原位点片段B6插入到乳酸菌表（-)69K5*KK*H+.:6KA)=.9A.)*A*KS*)TK，-F4G）引起的以仔达载体，
4、构建了表达-F4GB蛋白的重组乳酸菌表猪呕吐、严重腹泻和高致死率为特征的消化道传染达系统，以期获得-F4G口服活菌疫苗，依靠乳酸菌［,］病。该病是我国及世界各养猪国家仔猪早期死亡天然的抗菌抗腹泻作用和B蛋白刺激的特异性黏膜的重要疫病之一。疫苗免疫接种是预防本病的主要免疫作用，达到预防本病的目的。措施。实践证明，肠道黏膜免疫所产生的分泌型抗［#，%］"材料和方法体（KQ:’）是抵抗-F4G感染的有效抗体，而非经口免疫所产生的其它血清抗体，如Q:F、Q:U对本病"#"材料的免疫保护效果并不理想。因此选择安全无毒，能"#"#"质
5、粒和菌株：乳酸乳球菌表面表达载体够在肠道中存活并能表达和传递抗原物质的载体系(IJ/,,#及乳酸乳球菌!"#$%#%##&’("#$)’IJ3$$$由［!&0］统，有效地刺激黏膜免疫系统产生的黏膜免疫荷兰IQJV研究所惠赠；质粒(WD1B含有猪传染性胃［,%］应答对本病的防治具有重要意义。肠炎病毒B基因，由本实验室构建。-F4G有%种主要结构蛋白，分别为磷酸化的核"#"#$引物：应用=+*:=0X$软件设计引物，引物［"］衣壳蛋白I、膜蛋白U和糖基化的纤突蛋白B。-B"：2Y1D--FD’-FD’-F’’’’’’D-F--
6、DF--F--D-F其中B糖蛋白携带主要的N淋巴细胞抗原决定簇，F--F-’’-1%Y与-B/：2Y1DF-D-’F’D’D’DD’D-’-是唯一能诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的-’-D’F’DFF-’D’DDD’D-’-F--F1%Y用于从质粒结构蛋白；B蛋白含有宿主细胞氨肽酶受体（C’CI）(WD1B上扩增含有B基因’、N、D和L!个主要抗原的识别位点，因此，B蛋白对病毒感染、发挥其致病位点的片段，上下游引物分别含有*+,!与-."!［/&,#］性和决定宿主细胞亲嗜性方面起关键作用。酶切位点（下划线标出）。引物由
7、上海生物工程有限基于-F4G的肠道致病特点和黏膜免疫特点，公司合成。基金项目：国家自然科学基金（%$%",$"!）"通讯作者。-.+：/01!2,122,3$%/2；4156*+：7*8*9:+*;76<==>?=5作者简介：唐丽杰（,3",@），女，吉林省梨树县人，讲师，在读博士，从事分子病毒学研究。4156*+：A69:+*8*.;,0%>?=5其他作者：史达，夏春丽，郁茵收稿日期：#$$01$"1$2；接受日期：#$$01$31$!；修回日期：#$$01,,1$/唐丽杰等：表达猪传染性胃肠炎病毒/基因的重组乳酸乳球菌
8、的构建及免疫原性分析ZM微生物学报（?==7）S（7?）NSF!"!"#主要试剂：兔源抗!"#$高免血清本实验室/.$FS=型K,%,9JW!KW5:J#转印装置将蛋白转制备；乳链菌肽（%&’&(）、)*+标记的羊抗鼠,-.、)*+移到经转印缓冲液平衡的硝酸纤维素膜上，接通电?标记的羊抗兔,-"均购自/
