表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒的构建.pdf

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1、第33卷第3期中国预防兽医学报VO1．33．NO．32011年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMar．20l1doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．03．02表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒的构建耿合员，孙元，韩宗玺，邵昱昊，仇华吉，孔宪刚，刘胜旺(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨15OOO1)摘要：为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原s1蛋白的重组腺病毒，本研

2、究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以IBVCl<／cH／LHLJ／04V株s1基因为外源插入靶基因，通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVSl蛋白(90ku)的重组腺病毒，命名为rAdV．S1。通过PCR鉴定、间接免疫荧光及westernblot检测证实s1蛋白在重组腺病毒中获得表达。对构建的重组腺病毒和亲本腺病毒的生长动力学分析表明，该重组病毒的毒价为10TCID(／mL，并且两者在生长动力学方面无显著差异。本研究为动物试验和该重组腺病毒免疫特性的研究奠定基础。关键词：禽传染性支气管炎病毒；S1基因；重组腺病毒中图分

3、类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2011)o3—0173．04ConstructionofrecombinantadenovirusexpressingS1subunitofspikeproteinofinfectiousbronchitisvirusGENGHe—yuan，SUNYuan，HANZong—xi，SHAOYu—hao，QIUHua-ji，KONGXian—gang，LIUSheng—wang(DivisionofAvianInfectiousDiseases，StateKeyL

4、aboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：TheS1subunitofspikeprotein(90ku)ofinfectiousbronchitisvirus(IBV1iSthemainimmunodominantproteinwhichcaninducevirusneutralizationandh

5、aemagglutination—inhibitionantibodiesInthisstudy．arecombinantreplication．defeetivehuman5adenovirus(rAdV—S1thatexpressesS1genefromIBVstrainCK／CH／LHLJ／04Vwasconstructedwithviraltiterofl0TCIDdmLinHEK293．WesternblotandindirectimmunofluorescenceassayindicatedthattheS1ge

6、newasexpressedinHEK293cellsinfectedwithrAdV—S1．ThegrowthdynamicsindicatedthattherewerenostatisticallydiferencesbetweentherAdV—S1andparentaladenovirus．TherAdV—S1couldbesuedtofurtherstudyfortheimmunogenicityinchickens．KeyWOrds：infectiousbronchitisvirus；S1gene；recombi

7、nantadenovirus鸡传染性支气管炎(Avianinfectiousbronchitis，白，即表面纤突(s)蛋白、膜(M)蛋白、小膜(E)蛋白IB)是由IB病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接和核衣壳(N)蛋白。其中，S蛋白由亚基因组触性呼吸道传染病。IBV能够在消化道上皮、输卵mRNA2编码，在宿主细胞内首先以前体的形式合管、肾脏中复制，引起产蛋鸡产蛋量和蛋品质下成，随后在蛋白酶的作用下被裂解为两个亚单位：降，是危害养禽业的主要病原之一⋯。s1和$2t。S蛋白的裂解为病毒感染所必需，并且IBV为线性、单股正链

8、、不分节段的RNA病每个亚单位具有不同的功能，s1蛋白参与病毒与细毒，基因组大小为26．7kb，编码4种主要结构蛋胞受体的结合，而s2蛋白将S1蛋白锚定在病毒囊半Correspondingauthor收稿日期：2010-10—03基金项目：匡I家十一五科技支撑计划重大资助项目(2006BA