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《禽传染性支气管炎病毒 S1 基因植物表达载体的构建.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、浙江大学学报(农业与生命科学版)27(3):293～296,2001JournalofZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.)文章编号:100829209(2001)0320293204禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建吴建祥,周继勇,程丽琴,沈行燕,丁红梅(浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州310029)摘 要:以含传染性支气管炎病毒(ZJ971毒株)S1基因的质粒PBS为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到1.7kb左右的S1基因产物;用XbalI和Ba
2、mHI酶切纯化,并在T4DNA连接酶的作用下,定向克隆到植物表达载体PBI121中,PCR及酶切鉴定表明,质粒经三亲交配已导入根癌农杆菌中L关 键 词:禽传染性支气管炎病毒;S1基因;植物表达载体中图分类号:S858.3;Q782文献标识码:AWUJian2xiang,ZHOUJi2yong,CHENGLi2qin,SHENXing2yan,DINGHong2mei(InstituteofPreven2tiveVeterinaryMedicine,ZhejiangUniversity,Hangzhou3100
3、29,China)TheconstructionofplantexpressionvectorofS1geneofavianinfectiousbranchitisvirus.JournalofZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.),2001,27(3):293～296Abstract:TheS1geneofavianinfectiousbronchitisvirus(ZJ971strain)wasamplifiedbypolymerasechainreactionwithsp
4、ecialprimerscontainingXbalIandBamHI.ThepurifiedPCRproductwasdigestedbytherestrictedenzymeXbalIandBamHI.ThedigestedandpurifiedS1geneofinfectiousbronchitisviruswasclonedintoplantexpressionvectorpBI121.TheresultshowsthatpBI121withS1genewassuccess2fullytransfer
5、redintoAgrobacteriumtumefaciens(Aotumefaciens)withmethodsofPCRandrestricteden2zymes.Keywords:avianinfectiousbronchitisvirus;S1gene;plantexpressionvector 禽传染性支气管炎病毒(AvianInfectious成的寡聚蛋白,S1和S2均为糖蛋白多肽,其分BranchitisVirus,IBV)属冠状病毒科冠状病毒子量分别为90kD和84kD,用酶去除寡糖后[2,
6、3]属,因IBV抗原性的漂变可引起呼吸型、肾型、S1和S2的分子量分别为64kD和61kDL[4]腺胃型、肌肉型等不同病变类型的鸡传染性支Cavanagh确证S1蛋白是宿主的主要保护性气管炎,对养禽业危害极大,是最重要的传染病抗原,能诱导机体产生中和抗体和血凝抑制抗[1]之一L该病毒属单股正链RNA病毒,具有S、体,继而使机体得到保护,在免疫学方面起着重M和N三种结构蛋白LS蛋白是由S1和S2组要作用的S1基因一直是世界各国研究该病毒的热点L自20世纪90年代以来,国内外对IBV的研究取得了长足进展,已有关于
7、IBVS1基因收稿日期:2000212215基金项目:国家自然科学基金资助项目(30070570)在昆虫杆状病毒、痘苗病毒等载体中进行表达作者简介:吴建祥(1968-),男,浙江诸暨人,硕士,讲[5,6]的报道,但尚无在植物中表达的报道L为探师,主要从事免疫学和分子生物学研究L讨植物表达家禽病毒基因的可能性,我们利用©1995-2004TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.294浙江大学学报(农业与生命科学版)第27卷 已获得的禽传染性支气管
8、炎病毒S1基因成功在37℃酶切2h;pBI121质粒用XbalI和地构建了植物表达载体系统LBamHI在37℃酶切5hL酶切产物用QIAGEN公司的GelExtractionKit割胶回收L两种酶切1 材料与方法产物在16℃条件下用T4DNALigase连接过夜L连接产物全部转化DH5A感受态细胞,在含1.1 菌种及质粒卡那霉素50LgömL的LB固体培养基上挑取 大肠杆菌DH5A,根癌农杆菌EH
