禽传染性支气管炎病毒s1基因自杀性dna疫苗的分析

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1、四川农业大学硕士学位论文225个氨基酸残基【161。M基因是保守性较高的基因，任涛等【17】(2002)通过对国内9株地方分离株的M基因序列分析发现，IBVM基因的变异属于高频率的同义突变，不同毒株间存在重组、缺失、插入及点突变等变异。刘胜旺等‘1明(2001)获得了IBvLk株M基因的核苷酸序列，与国内外参考毒株相比较发现彼此间核苷酸序列同源率为85％’92％，氨基酸同源率为83％’92％。Jia等f191(1997)在研究IBV的一个重组的新变异株cU—T2时发现，其M蛋白与其它11]V的同源率仅有85．8％’88．896。M基因在进化中比较保守，M蛋白与病毒的复制有关，同时M蛋白可能是重

2、要的免疫原基因，M基因上可能存在重要的抗原决定簇，以M基因作为DNA疫苗，能够避免不同血清型交叉感染。(3)N基因N基因的表达产物h蛋白的病毒内部核衣壳的组成蛋白，由409个氨基酸组成，可被磷酸化，分子量约46KD，磷酸化后为51KD。具有核酸结合蛋白的特点，以便于包裹核酸，使之易于装配入病毒内部，N基因可能在病毒复制中发挥功能作用。N基因在进化中相当保守，Williams等【20】(1992)和Zwaggstra等【2l】(1992)对27个IBV分离株N蛋白的分析发现，其氨基酸差异仅为2％-6％。WilliamsV'I(1993)比较了几种不同的IBV株，发现其N蛋白的同源率为91．1％-

3、96．5％，核苷酸序列在730-800和1138～1166两个区域高度保守。周生、王红宁等圆(2002)报道中国四川株与M4l标准株N蛋白基因的同源率为93．1％母8％；近年来的研究表明IBVN蛋白是免疫识别相关靶位，在细胞免疫和体液免疫中也起着重要作用。1．2禽传染性支气管炎疫苗的研究进展1．2．1IB弱毒疫苗弱毒疫苗是由抗原性很好的毒株通过鸡胚连续传代25次以上获得的．一般认为马萨诸塞型(Massachusette型)IBV是世界范围内分布最广泛的血清型，且马萨诸塞型能对异型毒株也产生较好的免疫力，该血清型的H52、Hl加和Ma5致弱活毒疫苗株为绝大多数国家所采用，其次是Corm疫苗株。活

4、疫苗常常能有效地刺激机体的免疫系统，激发体液免疫和细胞免疫两种免疫力；同时使用较为方便，许多可用作群体免疫(饮水免疫和喷雾免疫)，生产成本较低．然而，活疫苗致弱程度难以掌握；疫苗的运输、贮存和使用等条件要求较高；且砑川农业大学硕士学位论文疫菌株有一定的致瘸性和传播能力，接种疫菇后可能弓f起轻发的呼吸道反应，当鸡群中存在致病矬支原体时，会成梵慢馊呼吸道瘸暴发的激发因豢。此铃多株弱毒疫萤的使用，有可能引起基因重组而出现新的变异毒株甚至强毒株。这使得致弱活毒疫苗在理论上帮实践上都誉霹§§致擐本上缨熹控鼷IB豹滚纾闭。1．2．2IB灭活疫苗Gough、Box等1977年就报道了用油乳剩灭活瘢苗使m得到

5、有效控制，但是，这势没毙瞪睫IBV炎异株弓l起lB的暴发。蕤压，Finney等磷究表明玛二侩蔻能刺激良好的抗体反应；芷红宁f25】、张联盟等嗍1994年试制出传染性支气管炎(呼吸型、弩登)多羚演鬟裁必活疫萤；经区域试验逶鞠，该疫蘩对鸡安全无甏俸惩，劳戆有效地预防肾型IB，提高肾型传染性支气管炎痰区鸡群的成活率和生产效益。灭活疫苗安全往好，举存在教播病原和毒力返强静簿蹶，且麓激发良好豹体液免疫反巍。灭活疫苗的不足之处是使用剂量大，需要配合佐剂，制备比较复杂，因而成本较离。王秀清等闭系列研究证实在IBV的免疫保护中，体液免疫和细胞免疫占有重要地位，认失辩的疫嫠预防应将弱毒痰萤瀛奏润灭活癀萤注射续合

6、起来。王经字等f嚣l邋过试验研究认为用弱毒H120滴鼻与多价苗浚射同时进行是预防m受有效的方法。{．2。3ID基因工稚疫蓄对于m的防疫，一般霄成期多采用弱毒活疫萤免疫，开产期使用高效多价油巍剂灭活苗再免一次，但由于IBV血清型复杂，相互之间交叉保护力弱，因此嗣前生产上使用豹疫藏往往攀戏完全控制避戆流行秘发生。为了薅曼蔹戆突交拣出瑷，霹嚣尊又达到良好的免疫效果，国内外许多科研人员致力予基因工程疫苗的研制。利用基因王鬟疫萤迸孬免疫，其颈跨镑对缝弦、特异镌好，霆预防园流行帮缫发缀始兹途径，也是当前研究IBV的一大热点课题。通逑壳隆IBV蒸函组中主要免疫原基因sl编码基因，然霜经遗体外重缎和表达，获得

7、与sl阕源的体夕}蛋白表达产物，作冀IBV基匿王程萤，它具有意效、广诺、无毒和特异性强等优点。宋延华镣溯以S1基因的重组质粒为材料，分别构建了可袭达IBVsl蒸嚣的懿塞楞状痪毒转移载体霞羧，劳虽在昆虫缨貔孛{譬戮裹效表达，量发现熬译起始位点及其周围环境的不嗣将影响基因表达水平，但无免疫方面的相关报道。廖明等嗍将IBVHotleS1基戳蓬确遣撩久餮TnNPV蒺函缝审构建了两个重缀毒辣；TnNPV-(