细胞色素P4503A46基因的异源表达及药物代谢活性分析.pdf

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1、2015年28卷1期西南农业学报V01．28N0．1SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences381文章编号：1001—4829(2015)01—0381—05DOI：10．16213／j．cnki．scja8．2015．01．071细胞色素P4503A46基因的异源表达及药物代谢活性分析薛正楷，魏弘(1．泸州职业技术学院生物医学工程研究所，四川泸州646005；2．第三军医大学实验动物中心，重庆400038)摘要：为了克隆巴马小型猪细胞色素P4503A46基因，建立

2、P4503A46稳定表达肝癌细胞株(HepG2-P4503A46)，并探究其药物代谢活性，通过RT—PCR从肝组织中钓取基因P4503A46，将基因与真核表达载体pcDNA3．1连接并转染HepG2细胞，经G418筛选1O代，获得稳定表达重组细胞株HepG2一P4503A46，以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)探针药物，将探针药物与重组细胞在优化的细胞浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育，通过高效液相色谱仪检测其药物代谢(抑制)动力学参数，并将对照组进行比较分析。结果表明，本研究成功从人Bam

3、a小型猪肝组织克隆了P4503A46基因，并通过G418筛选，成功建立了细胞稳定表达株，其硝苯地平代谢活性显著高于阴性对照组(P<0．01)；因此，成功克隆、并建立了小型猪P4503A46的稳定表达细胞株(HepG2-P4503A46)，该细胞株具有显著的硝苯地平代谢活性。关键词：基因；克隆；重组细胞株；细胞色素P4503A46；代谢活性中图分类号：R349文献标识码：AHeterologousExpressionandMetabolicActivityAnalysesofCytoehromeP4503A46X

4、UEZheng—kai．一，WEIHong2(1．InstituteofBiomedicalEngineering，LuzhouVocationalandTechnicalCollege，SichuanLuzhou646005，China；2．LaboratoryAnimalCen—ter，CollegeofBasicMedicalScience，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400038，China)Abstract：Toestablishstablyexpr

5、essingrecombinantcelllineofP4503A46(HepG2-P4503A46)，andthedrugmetabolicactivityofHepG2-P4503A46wsadetected．Methods：SusserofaP4503A46geneWaSclonedfromBamaminiaturepigliverandthestablyexpressingcelllneHepG2—174503A46WaSobtainedundertheselectionofgentamyein(G41

6、8)，thenifedipine(NF)wasincubatedwiththerecombinantcellinesofHepG2andHepG2-P4503A46inoptimalconditions，thehishperformanceliquidchromatograph(HPLC)wasutilizedtodetectthemetabo-litesaftertheincubationended，significantmetabolicactivityWasobserved(P<0．001)．Result

7、sshowedthatthegeneofSusscrofaP4503A46Wascloned，andthecellinehetemlogouslyexpressingtheP4503A46wasestablishedsuccessfuly，theactivityanalysisdemonstra—tedthatthecellineofP4503A46hadthemetabolicactivitiesofnifedipine．Conclusion：stablecelllineofP4503A46Wasproduc

8、edsuece88-fuly，andsignificantlymetabolicactivitytonifedipinewa8observed(P<0．001)．Keywords：Gene；Clone；CytochromeP4503A46；Metabolicacrivity目前，全世界的小型猪有2O多个品系或品种，与裂齿类小动物相比，小型猪不但在解剖学、生国外的小型猪品种有美国Minn