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《中国红豆杉细胞色素p450还原酶的基因克隆、表达与活性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、HEREDITAS(Beijing)2010年11月,32(11):1187―1194ISSN0253-9772www.chinagene.cn研究报告DOI:10.3724/SP.J.1005.2010.01187中国红豆杉细胞色素P450还原酶的基因克隆、表达与活性分析阮仁余1,2,孔建强1,郑晓东1,张书香1,秦咸蕴1,程克棣1,王建明2,王伟11.中国医学科学院北京协和医学院药物研究所,卫生部天然药物生物合成重点实验室,中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室,北京100050;2.黑龙江中医药大学中医药研究院,哈尔滨150040摘要:细胞色素P450还原酶(Cyto
2、chromeP450reductase,CPR)是细胞色素P450羟基化酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。文章从中国红豆杉(Taxuswallichianavar.Chinensis)愈伤组织细胞中克隆CPR基因(TchCPR),TchCPR含有一个2154bp碱基的阅读框,编码717个氨基酸残基;在氨基酸水平上它与裸子植物细胞色素P450还原酶的同源性(>82%)高于其他被子植物的细胞色素P450还原酶(<74%)。在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达了全长和从N-端截短不同数目氨基酸残基的6个融合肽段,经亲和层析纯化,分析了表达的不同长度融合蛋白
3、的电子传递效率。结果表明截短长度大于61个氨基酸残基肽段的胞色素P450还原酶都能够诱导表达,在表达水平上无显著差异,而截短61个氨基酸的CPR融合蛋白电子传递的催化活性(1.6057nmolCytCred/min/mgTchCPR融合蛋白)高于其他4个融合蛋白。关键词:中国红豆杉;细胞色素P450还原酶;诱导表达cDNAcloning,heterologousoverexpressionandactivityanalysisofcytochromeP450reductaseofTaxusChinensisRUANRen-Yu1,2,KONGJian-Qiang1,ZHENG
4、Xiao-Dong1,ZHANGShu-Xiang1,
QINXian-Yun1,CHENGKe-Di1,WANGJian-Ming2,WANGWei11.KeyLaboratoryofBiosynthesisofNaturalProducts,MinistryofHealthofPRC,KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine,MinistryofEducationofPRC,InstituteofMateriaMedica,chineseAcademyo
5、fMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege,Beijing100050,China;2.AcademyofTraditionalChineseMedicine,HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,ChinaAbstract:NADPH-cytochromeP450reductase(CPR),apartnerforP450monooxygenases,servesastheelectrondonortoalmostalleukaryoticcytochromeP45
6、0s.OnecDNA(TchCPR)encodingcytochromeP450reductaseofT.chinensiswasisolatedfromcalluscells.ThecDNAcontainsanopenreadingframeof2154nucleotideswhichencodesaproteinof717aminoacidresidues.TheTchCPRhashighersimilaritytootherCPRsofgumnosperms(>82%)thanthatofangiosperms(<74%).Therecombinantfull-leng
7、thTchCPRandaseriesofN-terminaltruncatedconstructswithN-terminalfusionofHisTagwereobtainedandinducedtoexpressinE.coliBl21(DE3),andthenpurifiedusingaffinitychromatography.Thetrun-catedformsofN-terminalmorethan61aminoacidresiduescouldbeefficientlyexpressedw
