雷帕霉素在卡介苗（BCG）感染小鼠RAW264-7细胞过程中对NO的调控作用.pdf

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1、=一般熊鞠缝壤擎搬onlines●⋯装ystem：http：／／wwwjabiotech．orggy蹁：墨雷帕霉素在卡介苗(BCG)感染小鼠RAW264．7细胞过程中对NO的调控作用何玉龙张文清吴月红李敏王玉炯宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川750021通讯作者，wyj@nxu．edu．cn摘要巨噬细胞产生的一氧化氮(nitricoxide，NO)在抵御及杀灭病原微生物过程中起重要作用。为了解哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，mTOR

2、)信号通路在结核分枝杆菌(Myc0bacteriumtuberculosis，MTB)感染宿主巨噬细胞过程中对NO的调控作用，本研究在卡介苗(BacillusCalmette—Gu6rin，BCG)感染体外培养的BALB／c小鼠(Musmusculus)巨噬细胞系RAW264．7过程中添加mTOR信号通路的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin)，通过Griess、实时荧光定量PCR、Westernblot等方法检测NO及诱导性一氧化氮合成酶基IN(induciblenitricoxidesynth

3、ase，iNOS)mRNA及其蛋白的表达情况，同时以脂多糖(1ipopolysaccharides，LPS)处理的RAW264．7细胞作为参照。结果表明，与未经处理的空白对照组相比，BCG、LPS刺激6、12和24h可以极显著增加RAW264．7细胞中NO的产生fP<0．01)，iNOSmRNA及其蛋白水平表达极显著增)Jil(P

4、0．01)，但24h时rapamycin对产生NO的抑制作用不显著(P>0．05)，但同样可以极显著抑制iNOS的表达(尸<0．01)；LPS刺激6和24h时，10nmol／Lrapamycin可以极显著抑制RAW264．7细胞中NO的产生(P<0．01)；12h时，显著抑制NO的产生(P0．05)，12和24h时极显著抑制iNOS的表达(P<0．01)。结果显示，rapamycin在MTB感染宿主巨噬细胞过程中

5、对NO的产生有重要的调控作用，为揭示mTOR信号通路在结核病发生及发展过程中的作用提供重要的理论依据。关键词雷帕霉素(rapamycin)，卡介苗(BCG)，NO，诱导性一氧化氮合成酶基因(iNOS)，巨噬细胞RegulationofRapamycinonNitricOxideintheProcessofMouse(Musmusculus)RAW264．7CellsInfectedbyBacillusCalmette．Gu6rin(，BCG)HEYu—LongZHANGWen-QingWUYue—Ho

6、ngLIMinWANGYu—JiongKeyLaboratoryofMinistryofEducationforProtectionandUtilizationofSpecialBiologicalResourcesinWesternChina，NingxiaUniversity,Yinchuan750021．ChinaCorrespondingauthor,wyj@nxu．edu．cnAbstractNitricoxide(NO)producedbymacrophagesplaysacrucialr

7、oleintheprocessofresistingandkillingpathogenicmicroorganisms．Inordertodemonstratetheefectofmammaliantargetofrapamycin(roTOR)signalingpathwayonNOintheprocessofhostmacrophagesinfectedbyMycobacteriumtuberculosis，BALB／cmouse(Musmusculus)macrophagecelllineRA

8、W264．7wasinfectedbyBacillusCalmette—Gu6rin基金项目：国家重点基础研究发展计划f973)项目(No．2012CB126301和No．2012CB518801)、国家自然科学基金(No31160515和No．31260287)~宁夏自治区自然科学基金(No．NZ121051收稿日期：2014—02．18接受日期：2014．03．12懈h(BCG)，whichwereculturedinthepresenceofmTO