雷帕霉素对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响.pdf

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1、·5220·现代生物医学进展www．shengwuyixue．comProgressinModernBiomedicineVoL14NO．27SEPg014doi：10．13241／j．cnki．pmb．2014．27．007雷帕霉素对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响冰’李金存郑秉暄王超高星。叶菁丛(1第四军医大学口腔系五队陕西西安710032；2第四军医大学病理与病理生理学教研室陕西西安710032：3第四军医大学西京医院病理科陕西西安710032)摘要目的：探讨雷帕霉素(Rapamycin)对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响。方法：采用胶原酶灌

2、注方法分离和培养小鼠原代肝细胞，采用100IxM油酸诱导肝细胞内脂肪的合成。采用0、10、20、50M的雷帕霉素处理肝细胞12hr后，利用中性脂肪染料Bodipy493／503对肝细胞内的脂滴进行染色，荧光显微镜下观察细胞脂滴形态和数量。定量试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)的含量利用Westernblot检测不同浓度雷帕霉素处理的小鼠原代肝细胞脂滴表面蛋白ADRP的表达水平。结果：成功分离和培养了小鼠原代肝细胞，使用油酸处理能够明显增加原代肝细胞内脂滴的数量。随着体外雷帕霉素处理浓度的增加，荧光显微镜下观察发现原代肝细胞内脂滴的数量呈现明显的下降趋势，甘油三酯的含量也呈见明确

3、的下降趋势，在20ixM浓度下就表现出显著性差异。Westernblot结果显示雷帕霉素能够在抑制肝细胞内脂肪储积的同时降低脂滴表面蛋白ADRP的表达水平，并且随着雷帕霉素处理浓度的增加，其对ADRP表达的抑制越明显。结论：雷帕霉素能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积，同时降低脂滴表面蛋白ADRP的表达水平。也间接说明了mTOR信号通路能够影响肝细胞内脂肪的储积，也为脂肪肝的防治提供了一个新的实验基础。关键词：雷帕霉素；脂滴；脂滴表面蛋白；mTOR·中图分类号：O95．3；R544文献标识码：A文章编号：1673—6273(2014)27．5220．05EffectsofRapam

4、ycinontheMorphologyofLipidDropletsandtheExpressionofLipidDroplet．associatedProteinsinMousePrimaryHepatocytes米LIJin—CUll1,ZHENGBing-xuan~,WANGCh。GA0Xing3,YEJ弧(1DepartmentofStomatologycompany5，theFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an,Shaanxi,710032；2DepartmentofPathologyandPathophysiology,Fou

5、rthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an,Shaanxi,710032,China；3DepartmentofPathology,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversiO+,Xi'an,Shaanxi,710032,China)ABSTRACTObjective：Toinvestigatetheefectsofdiferentconcentrationofrapamycinonthemorphologyoflipiddroplets(LD)andtheexpressionoflipiddroplet

6、-associatedproteinsinmouseprimaryhepatocytes．Methods：Theprimaryhepatocytesofmicewereisolatedandculturedusingcollagenaseperfusion．200IxMoleicacid(0A)wasusedtostimulateandinducetheproductionofthelipidinthehepatocytesandthen0(contro1)，10，20，5OMrapamycinwereaddedrespectively．12hourslater，Bodipy

7、493／503stainingwasusedtoobservethemorphologyandamountofintracellularLDunderfluorescencemicroscope．TheFolchmethodandtriglyceridequantitativekitwereusedtoextractthetotalintracellularlipidsanddeterminetheTGcontents．Furthermore，theexpressionoflipiddropletass