雷帕霉素对小鼠星形胶质细胞体外诱导凋亡的影响.pdf

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1、·652·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2015，31(4)：652—658[文章编号]1000—4718(2015)04-0652—07雷帕霉素对小鼠星形胶质细胞体外诱导凋亡的影响尹乐乐，苏运钦，黄秀艳。，叶莎莎，陈真，曾耀英。(暨南大学附属第一医院临床检验中心，生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心，广东广州510632)【摘要]目的：探讨雷帕霉素(rapamyein，Rapa)对小鼠星形胶质细胞体外凋亡的影响。方法：无菌分离并体外培养C57BL／6J幼鼠脑组织星形胶质细胞。通过MTr比色法测定并分析Rapa浓度对幼鼠星

2、形胶质细胞存活的影响；SYTOX~Green荧光染色联合荧光酶标仪检测并分析Rapa对HO：、ionomycin、deferorxamine等诱导剂作用一定时间内细胞存活的影响；DiOC(3)染色分析Rapa在H：O氧化应激损伤条件下对星形胶质细胞线粒体膜电势的影响；分别采用H2DCFDA和MitoSOXRed荧光染色联合流式细胞术检测Rapa预适应对星形胶质细胞ROS生成以及线粒体内ROS含量的影响。结果：Rapa能促进H：O：以及ionomycin联合deferorxamine损伤作用下的星形胶质细胞的存活，对线粒体膜电势有保护作用，可降低O损伤作用下星形胶质细胞RO

3、S的产生并可以维持胞内线粒体ROS的含量在较低水平。结论：Rapa能够减少细胞内ROS的生成量并降低胞内线粒体内ROS水平；能够减轻H2O对细胞线粒体膜的损伤破坏，维护线粒体膜电势的稳定性，进而对氧化应激损伤介导细胞凋亡有一定的抑制作用。[关键词]雷帕霉素；星形胶质细胞；细胞凋亡[中图分类号]R329．21[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000—4718．2015．04．014EfectofrapamycinonapoptosisofmouseastrocytesinvitroYINLe．1e一，SUYun．qin，HUANGXiu—yan，YES

4、ha—sha，CHENZhen。，ZENGYao一·2ymg(DepartmentofClinicalLaboratory，TheFirstAffiliatedHospital，Instituteof~ssueTransplantationandImmunology，CollegeofLifeScienceandTechnology，JinanUniversity，Guangzhou510632，China．E-mail：tzengyy@jna．edu．cn)[ABSTRACT]AIM：Toobservetheeffectofrapamycinontheapoptosis

5、ofmouseastrocytesinvitro．ME-THoDS：TheastrocytesfromC57BL／6Jnewbornmousepupswereisolatedandprimarilycultured．TheeffectofrapamycinontheviabilityofastrocyteswasassessedbyMTTassay．ThemeanfluorescenceintensityofSYTOX@Greenstainintheastrocyteswasdetectedbyfluorescencemicroplatereaderinordertoan

6、alyzetheeffectsofrapamycinonthecelldeathin—ducedbyH2O2，ionomycinand／ordeferorxamin．DiOC6(3)stainingwasusedtoanalyzethemitochondrialmembranepo—tentialoftheastrocytesinducedbyH2O2．FlowcytometryanalysiswasusedtodeterminetheproductionofROSintheas—trocytesandmitochondriabystainingwithH2DCFDAan

7、dMitoSOXRedreagent，respectively．RESULTS：Rapamycinatconcentrationof0．5txmol／LprotectedtheastrocytesagainstcelldeathinducedbyH2O2ordeferoxamineplusionomy—cin．RapamycinprotectedthemitochondrialmembranepotentialofastrocytesfromtheinjuryofH202．Italsoreducedtheproductiono