雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究

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1、中图分类号R鱼51UDC610博士学位论文学校代码!Q53三密级公珏雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究ResearchontheeffectofRapamycinonglucosemetabolis。hllmanRlioma：ellsanditsantitumormetabolisminUmanRllomaCellSanItSantl-tUmormechanism作者姓名：李春涛学科专业：临床医学研究方向：外科学学院(系、所)：湘雅医院指导老师：刘运生教授答辩委员会主中南大学201

2、3年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：煎日期：兰亟一年』月坠日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和

3、借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：煎导师签名自量乡日期：卫年三月堕日雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究摘要：目的：胶质瘤是最常见的原发性脑部肿瘤，且多数切除后有复发可能。目前，针对恶性肿瘤细胞增殖、凋亡等方面的研究十分普遍。临床上使用的抗肿瘤药物大都是通过抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞的凋亡来发挥作用的。P13

4、列Akt／mTOR信号通路在多种恶性肿瘤中过度激活，调控恶性肿瘤的发生和发展。mTOR是P13K／Akt信号通路下游重要的激酶，参与调控包括神经胶质瘤在内的多种肿瘤细胞的生存和增殖。雷帕霉素是mTOR的抑制剂，能通过抑制mTOR的活性，参与调控P13l淞h，mTOR信号通路在恶性肿瘤细胞中的作用。然而，关于雷帕霉素治疗神经胶质瘤的作用及相关分子机制尚未研究清楚。在恶性肿瘤细胞中，糖酵解水平异常升高，多种糖酵解酶的表达和活性被过度激活，提示糖酵解途径可能为抗癌治疗提供丰富的靶点。最近有研究报道，mi

5、croRNA．143受mTOR通路调控，且在多种恶性肿瘤中表达异常下调，其靶基因包括糖酵解关键限速酶己糖激酶2(ⅧQ)。然而，关于mTOR通路、miRNA．143以及糖酵解途径在神经胶质瘤中的调控作用及三者之间的关系尚不清楚。本研究利用人神经胶质瘤细胞系U251和CHG．5，探索雷帕霉素在增殖、凋亡、糖酵解等多个方面对神经胶质瘤的调控作用，并探讨相关的分子调控机制。方法：1)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG．5细胞0、6、12、24h，MTT法检测U251和CHG．5细胞的增

6、殖能力。2)用100mM的雷帕霉素处理人胶质瘤U251和CHG．5细胞0、6、12、24h，FCM检测U251和CHG一5细胞凋亡水平的改变。3)用100mM的雷帕霉素处理人胶质瘤U251和CHG一5细胞0、6、12、24h，WesternBlotting检测磷酸化的S6激酶蛋白分子的表达水平。4)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG．5细胞O、6、12、24h，检测葡萄糖摄取和乳酸分泌的变化。5)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG．5细胞0、6、12、24h

7、，分别检测己糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的活性。6)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG．5细胞0、6、12、24h，WesternBlotting分别检测己糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的蛋白表达水平。7)用100mM的雷帕霉素分别处理人神经胶质瘤U251和CHG．5细胞0、6、12、24h，RealtimeqRT—PCR检测miR一143的表达变化。结果：1)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG．5细胞0、6、12、24h，随着处理时间的延长，细胞的增殖

8、呈下降的趋势。III2)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG一5细胞0、6、12、24h，随着处理时间的延长，细胞凋亡呈上升的趋势。3)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG一5细胞0、6、12、24h，随着处理时间的延长，S6K的磷酸化水平呈下降的趋势，提示mTOR活性受抑制。4)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h，随着处理时间的延长，细胞葡萄糖摄取和乳酸分泌量呈下降趋势。5)用100mM的雷