雷帕霉素对k562细胞p13kaktmtor通路的影响及其作用机制

《雷帕霉素对k562细胞p13kaktmtor通路的影响及其作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学历有。否则，承担相应法律责任。／’o!j’。>j研究生虢刹始导师签嗣溶二级学院领导≤◇．茹I、、。’j尊。+lMH年≥瓢目、河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包

2、含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：巍讣物导师签章油l埠)争日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3研究论文雷帕霉素对K562细胞P13K／AKT／mTOR通路的影响及其作用机制前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··12附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·16附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·28综述慢性粒细胞白血病的治疗⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯．45中文摘要雷帕霉素对K562细胞P13K／AKT／mTOR通路的影响及其作用机制摘要目的：雷帕霉素是一种大环内酯类免疫抑制剂，具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制侵袭、抑制血管生成等作用。雷帕霉素的主要作用机制是与免疫亲和蛋白(FKBPl2)结合形成RAPA．FKBPl2复合物，作用于哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)上从而阻断细胞信号传导，从而减少其下游分子4EBP．1、P70S6KB的表达，进而影响细胞周期和蛋白的合成以促进细胞凋亡并抑制肿瘤细胞的增殖，并且通过抑制VEGF、HIFla的表达抑制血管新生和降低肿瘤细胞的侵袭性及转移。慢性粒细胞白血病是一种骨髓增殖性肿瘤

5、，95％的CML患者具有BCR／ABL融合基因阳性。虽然TKIs应用使CML的治疗取得了重大的突破，但其存在耐药问题，因此需要寻找其他的治疗方法。本实验拟在研究雷帕霉素对K562细胞的P13K／AKT／mTOR途径的下游分子4EBPl、P70S6KB、VEGF、HIFla的影响，及通过电镜了解应用雷帕霉素后K562细胞形态学的变化，并通过酶组织化学染色了解雷帕霉素对K562细胞溶酶体及线粒体的影响。为雷帕霉素治疗慢性粒细胞白血病提供理论基础和依据。方法：体外培养K562细胞，在不同浓度雷帕霉素中干预24h，应用CCK8法检测雷帕霉素对K562细胞的抑制作用。根据CCK8的检测结果分别

6、选取0nmol／L、80nmol／L、160nmol／L、320nmol／L浓度的雷帕霉素处理K562细胞24h，后采用WesternBlot方法检测4EBPl、VEGF分子的表达情况，采用RT-PCR方法检测P13K／AKT／mTOR途径的下游分子4EBPl、P70S6KB、VEGF、HIFIcL的表达情况及BCR／ABL和SHIP的表达情况；应用电镜及NADH染色、酸性磷酸酶(ACP)染色了解雷帕霉素对K562细胞形态学及线粒体、溶酶体的影响。结果：1随着雷帕霉素浓度的增高对K562细胞的抑制率明显上升俨

7、中文摘要(P<0．05)。3随着雷帕霉素浓度的增高4EBPl、P70S6BK、VEGF、HIFla分子在mRNA水平表达明显降低(P<0．05)。4随着雷帕霉素浓度的增高细胞在电镜下出现的凋亡程度加重，在酶组织化学染色显示对溶酶体及线粒体细胞损伤加重。5雷帕霉素对SHIP基因和BCR／ABL融合基因(P>0．05)无明显作用。结论：l雷帕霉素可以抑制K562细胞的生长，促进K562细胞凋亡。2雷帕霉素通过抑制roTOR而降低其下游分子4EBPl、P70S6