雷帕霉素对端粒酶敲除鼠成体干细胞衰老的影响以与作用机制

《雷帕霉素对端粒酶敲除鼠成体干细胞衰老的影响以与作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、杭州师范大学硕士学位论文摘蛭摘要端粒是真核生物线性染色体末端的DNA重复序列和蛋白质形成的复合物，其结构高度保守。端粒酶的发现，解释了在细胞分裂中，DNA序列不会丢失的机制，为研究端粒与衰老或癌症的关系奠定了理论基础。众多研究表明，端粒缩短与人体衰老和退行性疾病的发生和发展密切相关。端粒酶敲除鼠是研究衰老和退行性疾病的经典动物模型。早期研究表明，限制能量摄入不仅可以延长小鼠寿命，还能延迟癌症、神经退行性疾病、糖尿病以及其他老年相关疾病的发生。另外研究表明，在年老的小鼠中，哺乳动物的雷帕霉素靶蛋白(roTOR)表达升高。roTOR是体内调节细胞生长、增殖和存活的重要蛋白

2、，能够通过调控细胞内能量f弋谢来影响干细胞的稳态维持。雷帕霉素可以与胞质蛋白FKBPI2相结合，特异性的干扰mTORCl的形成，进而干扰mTORCl的生物活性。为了研究雷帕霉素对端粒酶敲除鼠的作用，给端粒酶缺失小鼠注射，nTORCl的抑制剂雷帕霉素，发现处理组小鼠比对照组的寿命短。我对小鼠的造血干细胞以及小肠隐窝进一步分析发现，处理组比对照组小鼠的造血干细胞数目有略微增加，小肠干细胞数目减少，小肠十细胞凋亡增加，增殖减少。造血干细胞单克隆分析发现处理组比对照组的单克隆数目少，表明处理组比对照组的造血干细胞功能弱。根据文献报道，端粒酶敲除可以上调P53对DNA损伤修复的

3、调控。雷帕霉素处理端粒酶与P53双基圜敲除鼠，发现处理组与对照组的寿命没有差别。在分子水平上，我们利用蛋白印迹实验检测了端粒酶敲除鼠的mTORCl的下游P70S6K的表达。结果显示，端粒酶敲除鼠的P70S6K表达水平降低。关键词：端粒酶敲除鼠；mTOR；造血干细胞；小肠干细胞；FACS杭州I师范大学硕士学位论文AbstlactAbstractf、ehl

4、1leleisforinedfiomthecomplexofDNArepetativesequiniceandpt‘oteHis洲t1It、删ktl；Ifl：ell(．toflinearchtOlllOSOllleSo

5、feukatIroticcellsealditsstructtu’eishighlyCOllSel。{edIhe：di?--i，{∥；ol、telonlet’flseexplainsthenlechanismol、maitainmgDNAsequencewhilecell【jl、idui芷i、hrjflai(1atheoteticalfoundationfor’stud3，ingtherelationstlipbetweentelomeresand。圳ll譬州L；IIILt．Many．．'studiesshowthattelomereshot‘teningisclos

6、elyl‘elatedIoOCCtii’eilceand‘lc、chlll¨lIqhtunanagin’gandclegenel。afirediseasesl'elomei‘aseknockoutillOtlSeisaclassical川1IlmlIIll¨Iltlosludyaginganddegenel’ativediseasesSomeearlystudiessuggestthatellel‘gj川1{akt、∽s“it；lI¨Callexpalidmicelifespan，anddalayoccurrellceofmanydisease，suchascaiic

7、er，netilodegenet‘ati、ediseases．diabetesandotherage一1‘dateddiseaseOtherstudiesindicat(。tlManunalian．11ai。getOfRapalnytin(m’FOR)isinct‘easinglyexpl’essedinoldmiceIl”111I¨f{is；1keypioteintoIegulategt‘owth，proliferationandSI．1lviral，whichcailinfluenceIlolnotlls㈦州1、maintamenceot’stealcellsby

8、l‘egulateintl’acellulm‘energymetabolismRapam}cl{l。；ll}{}ccombmedwiththecytoplasmicpl’otemFKBPl2tointer‘ferethefoi‘nmtionoflil⋯1(’)R(、specificall3，andft．‘thm’interferebiologicalactivityofill’FORC1Inordel‘Ioslud＼11it、atI．apmi7lycillOiltelomet‘aseknockoutlilOtlSe．wemjectrapamycmof