国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖影响的机制研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究牛签名：互婶导师签名：b卜I孳院领导签名：。多年弓月=》9日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对

2、此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：五彩导师签名：、、、、7多孑年弓月扣日中文摘要国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖影响的机制研究摘要目的：探讨国产雷帕霉素(宜欣可)对人淋巴瘤细胞株Raji细胞的体外抗增殖作用及对细胞周期的影响，并探讨其分子机制。方法：常规体外培养人淋巴瘤细胞株Raji细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium．basedcolorimetricassay,MTT)法检测国产雷帕霉素不同浓度组(O、1、5、lO、20、40、50、100nmol／m1)、不同时间组(24、48、72h)细胞存活和生长的情况，从而选择适当的药物浓度及作

3、用时间点进行进一步的检测。根据上述MTT结果，筛选不同浓度的实验组(5、lO、20、40、50、lOOnmol／m1)分别与阳性对照组比较；筛选不同时间(24、48h)的实验组与12小时实验组(MTT试验抑制增殖不明显)及各自相应的阳性对照组比较，并用流式细胞仪(flowcytometry，FCM)测定各组国产雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响，然后提取经国产雷帕霉素50nmol／ml作用不同时间(O、12、24、48、72h)的细胞总蛋白，考马斯亮蓝标准曲线法(Bradford法)定量，以13-actin作为内参照，应用westernblot方法检测不同组别周期蛋白cycli

4、nD1、cyclinE、cyclinA、p27及凋亡蛋白抑制因子survivin蛋白的表达水平。结果：1MTT结果：国产雷帕霉素对Raji细胞具有抑制增殖的中文摘要作用。不同浓度国产雷帕霉素(1、5、10、20、40、50、100nmol／m1)处理细胞24、48、72小时后，与对照组相比各处理组吸光度值(oD)均有不同程度的下降，经SPSS统计软件处理数据后显示，国产雷帕霉素处理24小时后药物浓度为lnmol／ml和5nmol／ml的处理组与相应对照组比较无统计学意义；药物处理48小时和72小时后浓度为lnmol／ml的处理组与相应的对照组比较也无统计学意义，其余各不同浓度、不同时间

5、点的药物处理组与相应的对照组之间具有显著性差异(P

6、用呈明显的剂量．效应和时间．效应依赖关系。3Westernblot检测结果：国产雷帕霉素50nmol／L处理后cyclinDl、cyclinE、p27的表达没有明显变化。在国产雷帕霉素处理后不能检测到cyclinA和survivin蛋白的表达。结论：l国产雷帕霉素(宜欣可)通过阻滞Raji细胞周期于G0／Gl期而抑制Raji细胞的生长、增殖，其机制与下调cyclinA和survivin的表达有关。中文摘要2宜欣可对淋巴瘤可能具有治疗价值。关键词：国产雷帕霉素；淋巴瘤；Raji细胞；增殖；westernblot；细胞周期蛋白；survivin英文摘要Growthsuppressionof

7、humanBurkittlymphomacellsbyRapamycinABSTRACTobjective：Inthisproject,weinvestigatetheeffectsofmTORinhibitor-rapamycinonhumanBurkittlymphomacelllineRajicellsgrowthandstudythemolecularmechanism．Methods：Rajicell1ineswereincubate