雷帕霉素对人外周血b细胞im-9增殖和产生iggigm抗体的影响

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1、？－—＇？？二ｊ分类号Ｒ６９密级公开ＵＤＣ６１０学校代码１０巧５秦＃义索硕±学位论文（专业学位）血Ｂ細胞－雷帕霉素对人外周ＩＭ９增殖和产生ＩｇＧ／ＩｇＭ抗体的影响研究生姓名；彭韶指导教师、职称：王毅教授专业学位类别（领域）：泌尿外科研究方向：移植免疫所在学院；第二临床学院二〇—五年五月ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＯＵＴＨＣＨＩＮＡＢ细胞－雷怕雲素对人外周血ＩＭ９增症及产生ＩｇＧ／ＩｇＭ抗休的影喻生及增殖的影响论文作者签名：聲瓜广指导教师签名Ｊ

2、此－一论文评阅人１：吴小候狀奇蔓重食怎率错饼匯暢岛幸．２之掌巨地■评阅人；干洛夫皆餐接辜恥衍齡区獻ｊ评阅人３；答辩委员会主席：肖巧叛據宁前梓鴨怒研帮巧１蚕员：袁守军素Ｌ嫂守词澡争私＾巧隹燒＾委员２：唐小卿攸據鴻睾大痒賃穀研全＾良委员３；陈仙考Ｌ狼■療耸載养陳＾乂三委员４，秦国庆終投碱竿终所知茅度晴３委贵５；委员６：答辩日期１５年０５月巧日：２０南华大学学位论文原创性声明本人声巧，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加＾＾

3、＾标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。化作者签名年ｉ＇月如南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本晚文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被

4、査阅和借阅；学校可ｙ■公布学位论文的全部或部分内容，可采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全义数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授极。口辟气处曰作者签名：导师签名：ｉ瓜少集巧＞巧雷帕霉素对人外周血B细胞IM-9增殖及产生IgG/IgM抗体的影响生及增

5、殖的影响摘要目的：观察不同浓度雷帕霉素（Rapamycin）对人外周血B淋巴细胞（IM-9）IgG、IgM产生的影响；探讨Rapamycin抑制B淋巴细胞产生血型抗体的可能机制，为临床ABO血型不相容器官移植免疫抑制方案的应用提供实验依据。方法：①ELISA检测Rapamycin对IM-9细胞IgG，IgM产生的影响。将相同浓度的IM-9细胞接种于6孔板，设空白对照组、DMSO组、Rapamycin25、50、100nmol/L组、硼替佐米阳性对照组6组。分别加入PWM刺激B细胞产生抗体，于PWM刺激3天及5天后分别向各孔加入不同浓度药物作用24h后，

6、离心收集细胞上清液，用ELISA方法测出各组产生IgG，IgM的量；②流式检测各组表达CD19、CD38的B细胞转化率。将相同浓度的9细胞接种于6孔板上，待细胞浓度达到10后，加入PWM刺激3天后分别向各孔加入不同浓度的Rapamycin及硼替佐米，作用24h后，以CD19、CD38抗体标记，固定，流式细胞仪测出各组细胞中CD19、CD38标记细胞的比例；③CCK8法观察Rapamycin对B淋巴细胞（IM-9）的增殖抑制作用。设Rapamycin12.5、25、50、100、200nmol/L五个浓度组、DMSO溶媒对照组、空白对照组，通过酶标仪测出

7、药物作用24h、48h的OD值，分别绘制出不同Rapamycin浓度和作用时间与抑制率Rapamycin关系图；④流式检测药物作用后的细胞周期比和凋亡率。将同密度的细胞接种于69孔板，待细胞数量达到10后，分别向各孔加入不同浓度Rapamycin、DMSO和硼替佐米，24h后收集细胞，离心固定，PI染色，流式细胞仪测出各组I细胞的细胞周期和凋亡率；⑤PCR检测Rapamycin对Bax、Bcl-2基因表达的影响。所有结果应用SPSS18.0软件进行统计学分析。结果：①Rapamycin对B细胞产生IgG、IgM抗体有一定抑制作用，其对IM-9细胞产生I

8、gG的抑制作用明显，且抑制程度与Rapamycin有着显著的剂量依赖性；对IgM的抑制作用较弱