赫赛汀联合雷帕霉素对人胃癌细胞nci-n87增殖和凋亡的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流，公共和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料，原始数据，申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：蜘&每砖导师签章研究生论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容之外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究

2、成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：古q镑硒翩‰20珧I；年3月18日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文赫赛汀联合雷帕霉素对人胃癌细胞NCI-N87增殖与凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8日lJ青⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18附图⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。42个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53中文摘要赫赛汀联合雷帕霉素对人胃癌细胞NCI-N87增殖与凋亡的影响摘要目的：1通过体外实验观察赫赛汀联合雷帕霉素对人胃癌细胞NCI-N87增殖、凋亡及周期的影响，评价赫赛汀联合雷帕霉素作用NCI-N87细胞是否存在协同作用；2观察赫赛汀联合雷帕霉素对人胃癌细胞NCI-N87中Her2蛋白、P．Akt、P-mTOR、P．4E-BPl表达的影响，初步探讨其诱导人胃癌细胞NCI-N87凋亡及下调相关蛋白的可能机制。方法：1常规培养人胃癌细胞NCI．N87。2采用流式细胞术(flowcytom

5、etry，FCM)检测人胃癌细胞NCI-N87和SGC．7901中Her2蛋白表达情况。3赫赛汀、雷帕霉素单药及联合作用NCI-N87细胞后，采用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium，MTT)比色法测定细胞光密度值(opticaldemity，OD)，计算出生长抑制率。研究赫赛汀、雷帕霉素单药及联合对NCI-N87细胞增殖的影响。4采用流式细胞术检测赫赛汀、雷帕霉素单药及联合对NCI-N87细胞周期分布、凋亡及Her2蛋白表达的影响。5采用Westernblot检测赫赛汀、雷帕霉素单药及联合对

6、NCI-N87细胞中P．Akt、P．mTOR、P．4E-BPl表达的影响。结果：1人胃癌细胞NCI-N87中Her2蛋白高表达，而SGC．7901中Her2蛋白未见明显表达。2不同浓度的赫赛汀对Her2阳性人胃癌细胞NCI-N87无论作用24小时、48小时还是72小时均未发现明显的细胞生长抑制作用。不同浓度雷帕霉素(O．1nmol／l、lnmol／l、10nmol／l、50nmol／l、lOOnmol／1)作用于NCIoN87细胞24小时后抑制率分别为7．77士1．12％、14．83士1．38％、25．03士1．79％、24

7、．83士2．94％、24．03士2．38％；48小时后抑制率分别为15．90士1．66％、中文摘要25．734-1．67％、32．70士1．75％、33．064-1．36％、32．974-2．15％；72小时后抑制率分别为22．83士1．33％、35．534-2．65％、45．234-2．01％、44．034-3．35％、44．274-2．31％。可以看出不同浓度的雷帕霉素作用于NCI-N87细胞24小时、48小时和72小时后均可抑制细胞的增殖。在一定浓度范围内(O．10nmol／1)，随雷帕霉素浓度的增加，抑制作用逐渐增强

8、，且随着雷帕霉素作用时间的延长，抑制作用也逐渐加强，各浓度组间存在统计学差异(砌．01)，与对照组相比，差异均具有统计学意义(尸