卡介苗(bcg)激活的人外周血单个核细胞对hela细胞的杀伤作用研究

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1、卡介苗(BCG)激活的人外周血单个核细胞对HeLa细胞的杀伤作用研究论文作者签名：窆丝起指导教师签名：—j≥盔当———一论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：沈柏华／主任医师／浙江大学附属第一医院夏丹／主任医N／浙江大学附属第一医院林考兴／主任医师／中国人民解放军117医院陈昭典／教授／浙江大学附属第一医院吕伯东／教授／浙江中医药大学附属第--N院杜传军／主任医N／浙江大学附属第二医院答辩日期：2013年2月27日浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。⋯一懿夕诚仅槲期。J弓年弓月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解澎姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：彩菇．签字日期：

3、2．01弓年弓月，日导师签名：＼＼乱乞L。导师签名：＼乱厶k签字日期：Z。t3年3月(日浙江大学硕士学位论文致谢本课题受浙江省卫生厅课题((BCG治疗和预防泌尿生殖系尖锐湿疣的基础与临床研究》(2008A069)资助。时光如梭，转眼三年硕士研究生的学习生活即将结束。值此论文完成之际，衷心感谢三年来一直关心、支持和帮助我的老师、同学、朋友们。首先谨以最诚挚的敬意感谢我的恩师汪朔教授三年来对我的学习和生活给予的关怀和教诲。从课题设计、具体实验到论文撰写都凝结了汪老师的心血和智慧。汪老师和蔼可亲的人格魅力，严谨的治学态度，渊博的专业知识和精湛的医疗技术是我永远学习的榜样。师思重于泰山，我将永

4、远铭记于心。衷心感谢课题组成员、我的实验指导吴灵娇老师在实验上给予的指导和帮助。衷心感谢泌尿外科夏丹老师、孟宏舟老师、潘昊老师、王逸民老师、姚晓霖老师在我上临床学习过程中给予的帮助。衷心感谢传染病国家重点实验室姚航平老师、朱秀明师兄、钱韵师姐、沈玲俞梦飞等同学在实验上给予的指导和帮助。衷心感谢在百忙之中参加我的学位论文评阅和答辩的各位专家、教授。衷心感谢刘卓、潘华锋、楼扬锋、顾利锋、诸林峰等师兄弟在学习和生活上对我的关心和帮助。衷心感谢我的父母无微不至的关爱和鼓励，正是他们在背后默默的付出，才使我得以顺利完成学业。最后，衷心感谢参与本课题研究的所有志愿献血者。浙江大学硕士学位论文中文摘

5、要卡介苗(BCG)激活的人外周血单个核细胞对HcLa细胞的杀伤作用研究浙江大学医学院硕士研究生导师_町‘y’r外科学(科学学位)卢晓庆汪朔中文摘要目的：初步探讨卡介苗(BacillusCalmette．Guerin，BCG)X僦HPV感染疾病的治疗作用，寻求BCG治疗抗HPV病毒的证据。研究在细胞水平上BCG激活的入外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)对HPV感染细胞的周期及凋亡的影响，并探讨其对细胞中HPV-E7蛋白以及RB／E2F1通路的影响。方法：选择6个健康志愿者，抽取新鲜的外周血，用细胞分离液分离出单个核细胞(PBMC)，

6、用卡介苗刺激PBMC5天作为BCG激活的杀伤细胞(BCG．activatedkillercell．BAK)，未刺激的PBMC作为自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)。激活的人外周血单个核细胞与高危HPVl8感染转化的宫颈癌细胞系HeLa细胞在不同浓度比下共同培养。相互作用20小时后，用MTS法分别检测激活的外周血单个核细胞和未激活的外周血单个核细胞的杀伤率；收集作用后的HeLa细胞，用流式细胞术分别检测细胞周期分布及凋亡情况：同时用实时荧光定量PCR和Westernblot检测HeLa细胞中E7基因以及RB／E2F1通路相关基因的转录和翻译水平变化。结果：在效靶比(

7、效应细胞／靶细胞，E／T)分别为40：1、20：1、10：1情况下，卡介苗激活的杀伤细胞(BAK)对HeLa细胞的杀伤率分别为24．08％、14．74％、6．8％，而未激活的外周血单个核细胞作为自然杀伤细胞(NK)的杀伤率分别为17．62％、¨浙江大学硕士学位论文中文摘要10．78％、5．8％。在效靶比为40：1和20：1时BAK细胞的杀伤率大于NK细胞，两者差别有显著性意义(P<0．05)。在20：1效靶比相互作用下，收集HeLa细胞做周期及