茶树叶绿体DNA提取方法研究.pdf

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1、分子植物育种，2014年，第12卷，第3期，第562—566页MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．3，562—566技术主题TechnologyFeature茶树叶绿体DNA提取方法研究陈春梅陈亮中国农业科学院茶叶研究所，国家茶树改良中心，农业部茶树生物学与资源利用重点实验室，杭州，310008通讯作者，liangchen@mail．mcaas．corn摘要为了探究茶树叶绿体DNA(chloroplastDNA，cpDNA)的提取方法，本研究采用改进的高盐一低pH法和Percoll密度梯度法提取cpDNA。结果表明，两种方法提取的cpDNA经分光光度

2、计检测，A。∞／A：踟值在1．80~1．90，高盐一低pH法提取的cpDNA产率为0．65Ixg／g，Percoll密度梯度法提取的cpDNA产率为0．07Ixg／g。提取的cpDNA经PCR检测，均能扩增出目标片段，但高盐一低pH法效果更好。研究结果为进一步研究茶树叶绿体基因组结构、功能等方面奠定基础。关键词茶树(Camelliasinensis)，叶绿体DNA，高盐一低pH法，密度梯度法ExtractionMethodofChloroplastDNAofTeaPlant(Camelliasinensis)ChenChunmeiChenLiang’TeaResearchInstitute

3、oftheChineseAcademyofAgriculturalSciences，NationalCenterforTeaImprovement，KeyLaboratoryofTeaBiologyandRe—sourcesUtilization，MinistryofAgriculture，Hangzhou，310008Correspondingauthor．1iangchen@mail．订icaas．cornDOI：10．13271／j．mpb．012．000562AbstractToexploreaneficientmethodofextractingchloroplastDNA(cp

4、DNA)fromteaplant，themodifiedHigh—saltLow—pHandPercollDensityGradientCentrifugationmethodswerecomparedandevaluated．Theresultsshowedthatbothmethodssuccessfullyisolatinggood—qualitycpDNAwithanA26o／A280ratiobetween1．80~1．90，however，ahigheryieldwasobtainedbythemodifiedHigh—saltLow—pHmethod(0．65Ixg／g)as

5、comparedtotheothermethod(0．07g／．Inaddition，althoughcpDNAextractedusingbothmethodscouldserveasatemplateforPCR，be~erresultswereobtainwiththemodifiedHigh—saltLow-pHmethod．Thisresearchlaysthegroundworkforsequencingandanalyzingoftheentirechloroplastgenomeofteaplant．KeywordsTeaplant(Camelliasinensis)，Ch

6、loroplastDNA，High—saltLow—pHmethod，DensityGradientCentrifugationmethod叶绿体最早发现于自养生物蓝藻中，经进化成前，已有401例来自不同植物的叶绿体基因组全序为植物细胞的一部分，以质体的形式存在于陆地植列被公布(http：／／www．ncbi．nlm．nih．gov／nuccore)。物、藻类和部分原生生物中，是生物体内执行光合作叶绿体基因组可用于细胞质遗传、遗传分化及用的半自主性细胞器，参与氨基酸、核苷酸、色素、蛋遗传多样性等方面的研究，获得高质量的cpDNA是白质等多种物质代谢(NeuhausandEmes，2000)

7、。叶绿开展相关研究的前提条件之一。关于提取高等植物体DNA(chloroplastDNA，cpDNA)发现于2O世纪cpDNA常用的方法主要有3种：蔗糖密度梯度离心60年代初期，于烟草(Nicotianatabactxm)(Shinozaki法(Hiraieta1．。1985)、Percoll密度梯度离心法(Hein．eta1．，1986)、地钱(Marchantiapolymorpha)(Ohyamaethorstet