茶树不同组织提取DNA质量差异比较.pdf

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1、试验研究茶树不同组织提取DNA质量差异比较陈志辉陈常颂游小妹林郑和钟秋生(福建省农业科学院茶叶研究所，福建福安355015)摘要：本研究以肉桂品种为材料，采用CTAB法对四个不同组织提取的DNA进行比较，结果显示：叶片中能够得到质量较好且较纯净的DNA；茶籽中提取的DNA浓度最大，但是含有大量RNA和蛋白质等杂质；花蕾和花中得到的DNA不是量非常少就是降解严重，也含有RNA。关键词：茶树；叶片；茶籽；花；DNA质量茶树(s／~ens／s)是我国重要的经济作物之一，CTAB、EDTA、TriS等试剂均购于上海生物工程

2、公司。栽培历史悠久，分布广泛，而且种质资源极为丰富，然而茶树1．2CTAB法抽提茶树基因组DNA的遗传基础研究却十分薄弱。优良品种资源的鉴定，多采用形取茶树不同组织材料，分别放入研钵中，加0．8ml态学鉴别技术，存在其局限性。传统育种方法主要集中在分离1．5×CTAB研磨成糊状，倒入1．5ml离心管中(如不马上抽捉群体后代当中进行优化选择，这种选择大都建立在表型基础之可以放入一20℃冰箱保存)，放入65℃水浴锅中加热25min，上的，环境对于性状的干扰和影响十分复杂也难以避免。由于取出离心管冷却后加入等体积的氯仿：

3、异戊醇(24：1)，放在生物体基因组DNA序列不受环境与发育时期影响，个体间的差摇床轻摇10min，再lO000r／min离心5-10min，吸上清液到另异只源于所含DNA序列的差异。DNA的稳定性便于揭示品种间一个新离心管中，加入2倍上清液体积的95％乙醇，上下颠倒的遗传多样性而排除了环境变异造成的表型变异给形态鉴别造数次出现絮状沉淀，用200ul枪头小心吸出沉淀至另一个新离成的影响，因此，分子标记可为茶树提供准确、可靠的遗传标心管中，加iml70％乙醇清洗杂质，上下颠倒数次后倒去乙醇，记，对于茶树的遗传多样性研

4、究和优质品种资源的鉴定都有重吹干沉淀，加入200ulTE或ddH0溶解过夜，-20冰箱保存备用。要作用及意义。随着分子生物学研究的深入，基因组学也1．5XCTAB配方：CTAB15g，1MTriS·C1(pH8．0)越来越广泛的应用于茶树研究，而高质量DNA的提取纯化是整75ml，0．5MEDTA30ml，NaCI61．4g，最后加dH20定容至个工作的基础n。茶树的叶片，花蕾，花和茶籽中有大量的1000ml。不同次生物质，这些物质容易与核酸形成复合物，影响基因1．3基因组DNA电泳检测组DNA提取质量，甚至可能导

5、致扩增失败。为了提高茶树基因取5u1抽提好的茶树DNh，加入lOulddH0稀释，再加组DNA的质量，研究者们对不同提取方法进行过了一系列的探3ul10×Loadingbuffer混匀后点样，1％琼脂糖胶，电泳反讨n，但是对不同部位进行比较的报道较少。本研究以福建冲液为0．5×TBE，180V电泳30min，再EB(溴化乙锭)染色，茶树品种肉桂为材料，采用CTAB法对四个不同部位提取的DNA于凝胶成像系统中拍照保存。进行比较，结果显示叶片和茶籽中能够得到质量较好的DNA，0．5×TBE配方：Tris5．4g，Bor

6、icacid2．75g，0．5M花蕾和花中得到的DNA不是量少就是降解严重，不太适合用于EDTA(pH7．9)2ml，加dH20到lO00ml。提取DNA。1．4分光光度法测定基因组DNA用Ultrospec2100proUV／Spectrophotometer型核酸蛋l材料与方法白仪对本实验提取的基因组DNA分别进行了总DNA纯度和浓1．1材料度的测定，测定0D瑚／OD。。比值和浓度。供试材料为采自福建省农业科学院茶叶研究所种质资源2结果分析与讨论圃的肉桂品种，取样时取一芽二叶的叶片，花蕾，开放的花和成熟的茶籽。

7、样品采集后置于一20~C冰箱备用。提取DNA用的2．1琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA基金项目：现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARs一23)作者简介：陈志辉(19750，男，博士，助理研究员，研究方向：茶树遗传育种与分子生物学通讯作者：陈常颂(1973一)，男，副研究员．研究方向：茶树种质资源与遗传育种2014年第三期鞠