甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析.pdf

《甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、南方农业学报JournalofSouthernAculture2014，45(4)：546-550ISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969~：issn．2095-1191．2014．4．546甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析岑华飞l，，黄玉新，罗霆’3，周珊．一，高轶静．一，段维兴，一，杨翠芳．一，周会一，张革民，一，刘昔辉l3(广西大学农学院，南宁530005；广西甘蔗遗传改良重点实验室，南宁530007；广西农业科学院甘蔗研究所／农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验

2、室，南宁530007)摘要：【目的】探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法，为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考。【方法】参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNaseI差速离心处理法，采用改良的DNaseI差速离心法提纯甘蔗cpDNA，并对其妇L基因序列进行比对分析，证实所提取cpDNA的可行性。【结果】采用改良的DNaseI差速离心处理法提取能得到量多、杂质少的cpDNA，用Eppendorf蛋白核酸测定仪检测，平均每克甘蔗样可提取2．71IxgcpDNA，ODOD：为1．79～1．90。对提取的cpDNA的trn工基因序列进行

3、比对分析，证实参试的甘蔗栽培种、斑割复合体后代及其回交材料的叶绿体咖L基因与已报道的甘蔗栽培种NCo310、SP_80．3280和割手密HN0046的trnL基因相似度均在99．0％以上，并在381、386、389、392、393、400、488、490bp等8个位点上检测出碱基突变、插入和缺失现象。【结论】采用改良的DNaseI差速离心处理法提取甘蔗叶绿体DNA具有可行性，提取的甘蔗cpDNA完全可以用于后续的分子水平研究。关键词：甘蔗；叶绿体DNA；提取；上基因；改良的DNaseI差速离心法中图分类号：$566．1文献标志码：A文章编号：2095

4、—1191(2014)04—0546—05ExtractingmethodforsugarcanechloroplastDNAanditsverificationCENHua-fei，HUANGYu-xin一，LUOTing’，ZHOUShan，GAOYi—jing，DUANWei-xing，YANGCui-fang，ZHOUHui，ZHANGGe—min，LIUXi—hui，(AgriculturalCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；GuangxiKeyLaboratoryofSugarca

5、neGeneticImprovement，Nanning530007，China；SugarcaneResearchInstitute，GuangxiAcademyofAgriculturalSciences／KeyLaboratoryofSugarcaneBiotechnologyandGeneticImprovement(Guangxi)，MinistryofAgriculture，Nanning530007，China)Abstract：【Objective]Alab-friendlyextractingmethodforsugarcanecp

6、DNAwasexploredbasedonsugarcanetraitsinordertoprovidereferencesformolecularbiologyresearchofcpDNA．【Method]Re~rringtoDNaseIdiferentialcentrifugationtreatmentofriceandwheatcpDNA，sugarcanecpDNAwasextractedandpurifiedusingthemodifiedprocedure．tmLgenese—quencingwascomparedandanalyzed

7、toverifythefeasibilityofepDNAextraction．【Result】Highquality(OD：a)／OD280：1．79—1．90)andhighamountofcpDNA(2．71P．gpergramoffreshleaves)wasisolatedanddetectedbyEppendoftesterofpro—reinnucleicacid．ThetmLgenesinextractedcpDNAwerecomparativelyanalyzed．TheresultsshowedthattrnLgenesofthe

8、testedspecies(cuhispecies，Sacchal"lJmspontaneumhybrida