欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:56123552
大小:678.65 KB
页数:5页
时间:2020-06-04
《甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、南方农业学报JournalofSouthernAculture2014,45(4):546-550ISSN2095—1191;CODENNNXAABhttp://www.nfnyxb.cnDOI:10.3969~:issn.2095-1191.2014.4.546甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析岑华飞l,,黄玉新,罗霆’3,周珊.一,高轶静.一,段维兴,一,杨翠芳.一,周会一,张革民,一,刘昔辉l3(广西大学农学院,南宁530005;广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007;广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验
2、室,南宁530007)摘要:【目的】探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法,为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考。【方法】参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNaseI差速离心处理法,采用改良的DNaseI差速离心法提纯甘蔗cpDNA,并对其妇L基因序列进行比对分析,证实所提取cpDNA的可行性。【结果】采用改良的DNaseI差速离心处理法提取能得到量多、杂质少的cpDNA,用Eppendorf蛋白核酸测定仪检测,平均每克甘蔗样可提取2.71IxgcpDNA,ODOD:为1.79~1.90。对提取的cpDNA的trn工基因序列进行
3、比对分析,证实参试的甘蔗栽培种、斑割复合体后代及其回交材料的叶绿体咖L基因与已报道的甘蔗栽培种NCo310、SP_80.3280和割手密HN0046的trnL基因相似度均在99.0%以上,并在381、386、389、392、393、400、488、490bp等8个位点上检测出碱基突变、插入和缺失现象。【结论】采用改良的DNaseI差速离心处理法提取甘蔗叶绿体DNA具有可行性,提取的甘蔗cpDNA完全可以用于后续的分子水平研究。关键词:甘蔗;叶绿体DNA;提取;上基因;改良的DNaseI差速离心法中图分类号:$566.1文献标志码:A文章编号:2095
4、—1191(2014)04—0546—05ExtractingmethodforsugarcanechloroplastDNAanditsverificationCENHua-fei,HUANGYu-xin一,LUOTing’,ZHOUShan,GAOYi—jing,DUANWei-xing,YANGCui-fang,ZHOUHui,ZHANGGe—min,LIUXi—hui,(AgriculturalCollege,GuangxiUniversity,Nanning530005,China;GuangxiKeyLaboratoryofSugarca
5、neGeneticImprovement,Nanning530007,China;SugarcaneResearchInstitute,GuangxiAcademyofAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofSugarcaneBiotechnologyandGeneticImprovement(Guangxi),MinistryofAgriculture,Nanning530007,China)Abstract:【Objective]Alab-friendlyextractingmethodforsugarcanecp
6、DNAwasexploredbasedonsugarcanetraitsinordertoprovidereferencesformolecularbiologyresearchofcpDNA.【Method]Re~rringtoDNaseIdiferentialcentrifugationtreatmentofriceandwheatcpDNA,sugarcanecpDNAwasextractedandpurifiedusingthemodifiedprocedure.tmLgenese—quencingwascomparedandanalyzed
7、toverifythefeasibilityofepDNAextraction.【Result】Highquality(OD:a)/OD280:1.79—1.90)andhighamountofcpDNA(2.71P.gpergramoffreshleaves)wasisolatedanddetectedbyEppendoftesterofpro—reinnucleicacid.ThetmLgenesinextractedcpDNAwerecomparativelyanalyzed.TheresultsshowedthattrnLgenesofthe
8、testedspecies(cuhispecies,Sacchal"lJmspontaneumhybrida
此文档下载收益归作者所有