适合MSAP分析的核桃子叶DNA提取方法-论文.pdf

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1、林业科学研究2014，27(1)：128～132ForestResearch文章编号：1001-1498(2014)01-0128-05适合MSAP分析的核桃子叶DNA提取方法周贝贝，陈凌娜，张俊佩，裴东(中国林业科学研究院林业研究所，林木遗传育种国家重点实验室，北京100091)关键词：核桃；子叶；DNA提取；多糖；MSAP中图分类号：$718．46文献标识码：ADNAExtractionMethodofWalnutCotyledonSuitableforMSAPAnalysisZHOUBei—bei，CHENLing—M，ZHANGJun-pei，PElDon

2、g(ResearchInstituteofForestry，ChineseAcademyofForestry，StateKeyLaboratoryofTreeGeneticsandBreedingofStateForestryAdministration，Beijing100091，China)Abstract：Toobtainhigh-qualityDNAsuitableformethylation-sensitiveamplificationpolymorphism(MSAP)，a—nalysis，thematurecotyledonandtissuecult

3、uredcotyledonofwalnutcuhivar‘Liaoning一1’wereusedasthetestingmaterialsintheresearchofDNAisolationby3methods(SDS，highsaltCTABandmodifiedhighsaltCTAB)andthematureleartissuewastakenasthecontro1．TheconcentrationandintactnessoftheextractedDNAweredeter．minedusingaspectrometerandbyelectrophor

4、esisin0．8％(w／v)agarosegelsagainststandardsolutionsoflambdaDNA．HighqualityDNAwasextractedfromleaftissuesusingthehighsaltCTABmethodandthemodifiedhighsaltCTABmethod．NodetectableDNAwasextractedfromthematurecotyledonandcuhuredcotyledonusingSDSmeth—od．TheDNAwithhighqualitybutlittlequantityw

5、asextractedfromthematurecotyledonbutnottheextractcul—turedcotyledonusingthehighsaltCTABmethod．TheDNAwithhighquantityandqualitysuitableforMSAPanaly—sisfrombothmaturecotyledonandculturedcotyledonwasextractedusingthemodifiedhighsaltCTABmethod．TheDNAextractionmethodofwalnutcotyledonsuitab

6、leforMSAPanalysiswasestablished，whichcouldlayfoundationfordownstreammolecularbiologyexperimentandprovideareferencetothepolysaccharideremovalresearchinDNAextractionprocedure．Keywords：Juglansregia；cotyledon；DNAextraction；polysaceharide；MSAP核桃(JuglansregiaL．)营养价值高，含有丰富后续实验造成较大影响J。目前，核桃组织

7、全基因的脂肪酸和蛋白质J，子叶是核桃重要的营养储存组DNA提取方法主要集中在叶片组织。雷玲器官，作为常用的实验材料，可用来组织培养进行生等_6以13个河北核桃优系叶片为材料，比较了高盐根实验等相关研究-3]。MSAP是在AFLP基础上低pH值法、SDS法和CTAB法提取基因组DNA的建立起来的在全基因组范围检测5’一CCGG位点的效果，确定含3％PVP的高盐低pH值法为河北核桃胞嘧啶甲基化变化的实验技术J，具有多态性高、无叶片DNA提取的最适方法；然而，核桃子叶的DNA需预知DNA序列的优点，但其需要提取高质量的基提取目前没有较为有效的方法。本试验以‘辽宁1因组D

8、NA，存在