单条线虫DNA提取方法研究-论文.pdf

《单条线虫DNA提取方法研究-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、华北农学报·2014，29(2)：127—132单条线虫DNA提取方法研究容万韬，一，王金成，刘鹏，林宇，郭京泽，黄国明。，孙建华(1．天津师范大学生命科学学院，天津市动植物抗性重点实验室，天津300387；2．天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津300461)摘要：为探寻一种高效、稳定、廉价的单条线虫DNA提取方法，以6种植物寄生线虫作为试验材料，比较了4种方法，即直接裂解法、冻融裂解法、切割裂解法、切割冻融裂解法对单条线虫DNA的提取效果。结果表明，对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法与切割裂解法

2、高效、稳定，冻融裂解法效果较差，直接裂解法效果最差。对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法和切割裂解法可高效、稳定地获得高质量的单条线虫总DNA，满足下一步的PCR扩增需求。关键词：蛋白酶K；裂解；冻融；管内切虫；DNA提取中图分类号：S154．386文献标识码：A文章编号：1000—7091(2014)02—0127—06ResearchonDNAExtractionMethodsfromaSingleNematodeRONGWan—tao，WANGJin．cheng2LIUPeng，LINYu，，GUOJin

3、g．ze，HUANGGuo．ming，SUNJian—hua(1．CollegeofLifeSciences，TianjinNormalUniversity，TianjinKeyLaboratoryofAnimalsandPlantsResistance，Tianjin300387，China；2_Animal&Plant&FoodStuffsInspectionCenter，TianjinEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Tianjin300461，China)

4、Abstract：Toexploreaneficient，stable，low—costDNAextractionmethodfromsinglenematodeforthesupportofmolecularidentificationofnematodes，usingsixspeciesofplant-parasiticnematodesasexperimentalmaterials，fourDNAextractionmethods，namely，directlysismethod，freeze—thaw

5、lysismethod，cuttinglysismethod，freeze—thawcuttinglysismethodweredesignedandcomparedinordertochecktheirefficiencyofDNAextractionfromsinglenematode．Theresultsshowedthatcuttinglysismethodandfreeze-thawcuttinglysismethodwerethemosteficientandstablemethodsforDNA

6、extractionofsinglenematode，thenthefreeze—thawlysismethod，andthedirectlysismethodwastheworstone．TotalDNAwithhi【gh-qualityfromasinglenematodecouldbegainedeficientlyandstab-lythroughtwomethods，namely，cuttinglysismethodandfreeze—thawcuttinglysismethod．Andtheext

7、ractedDNAmeetedrequirementofthefollowingPCRamplification．Keywords：ProteinaseK；Lysis；Freeze—thaw；Nematode—cuttingintube；DNAextraction对线虫进行准确鉴定是线虫生物学特性及其发线虫DNA提取和单条线虫DNA提取2种方法。单病规律等研究的重要基础，对进一步制定有效的防条线虫DNA提取方法因其需要线虫量少、无须线虫治措施具有重要意义⋯。传统的植物线虫鉴定方纯化、简捷、廉价等优点在线虫分子

8、鉴定中备受青法主要依赖于形态特征和形态测量值，要求鉴定者睐。要有极为丰富的经验和技巧j。基于DNA的分子关于单条线虫DNA微量提取方法有较多的研鉴定方法对鉴定者的要求相对较低，是形态鉴定的究报道。Barstead等和Williams等使用WLB重要辅助手段，目前在线虫的分类鉴定中应用广泛。裂解液成功提取了单条秀丽小杆线虫的DNA。线虫分子鉴定的首要步骤是DNA的提取，包括大量Powers等将根结线虫