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时间:2020-04-27
《单条线虫DNA提取方法研究-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、华北农学报·2014,29(2):127—132单条线虫DNA提取方法研究容万韬,一,王金成,刘鹏,林宇,郭京泽,黄国明。,孙建华(1.天津师范大学生命科学学院,天津市动植物抗性重点实验室,天津300387;2.天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,天津300461)摘要:为探寻一种高效、稳定、廉价的单条线虫DNA提取方法,以6种植物寄生线虫作为试验材料,比较了4种方法,即直接裂解法、冻融裂解法、切割裂解法、切割冻融裂解法对单条线虫DNA的提取效果。结果表明,对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法与切割裂解法
2、高效、稳定,冻融裂解法效果较差,直接裂解法效果最差。对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法和切割裂解法可高效、稳定地获得高质量的单条线虫总DNA,满足下一步的PCR扩增需求。关键词:蛋白酶K;裂解;冻融;管内切虫;DNA提取中图分类号:S154.386文献标识码:A文章编号:1000—7091(2014)02—0127—06ResearchonDNAExtractionMethodsfromaSingleNematodeRONGWan—tao,WANGJin.cheng2LIUPeng,LINYu,,GUOJin
3、g.ze,HUANGGuo.ming,SUNJian—hua(1.CollegeofLifeSciences,TianjinNormalUniversity,TianjinKeyLaboratoryofAnimalsandPlantsResistance,Tianjin300387,China;2_Animal&Plant&FoodStuffsInspectionCenter,TianjinEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau,Tianjin300461,China)
4、Abstract:Toexploreaneficient,stable,low—costDNAextractionmethodfromsinglenematodeforthesupportofmolecularidentificationofnematodes,usingsixspeciesofplant-parasiticnematodesasexperimentalmaterials,fourDNAextractionmethods,namely,directlysismethod,freeze—thaw
5、lysismethod,cuttinglysismethod,freeze—thawcuttinglysismethodweredesignedandcomparedinordertochecktheirefficiencyofDNAextractionfromsinglenematode.Theresultsshowedthatcuttinglysismethodandfreeze-thawcuttinglysismethodwerethemosteficientandstablemethodsforDNA
6、extractionofsinglenematode,thenthefreeze—thawlysismethod,andthedirectlysismethodwastheworstone.TotalDNAwithhi【gh-qualityfromasinglenematodecouldbegainedeficientlyandstab-lythroughtwomethods,namely,cuttinglysismethodandfreeze—thawcuttinglysismethod.Andtheext
7、ractedDNAmeetedrequirementofthefollowingPCRamplification.Keywords:ProteinaseK;Lysis;Freeze—thaw;Nematode—cuttingintube;DNAextraction对线虫进行准确鉴定是线虫生物学特性及其发线虫DNA提取和单条线虫DNA提取2种方法。单病规律等研究的重要基础,对进一步制定有效的防条线虫DNA提取方法因其需要线虫量少、无须线虫治措施具有重要意义⋯。传统的植物线虫鉴定方纯化、简捷、廉价等优点在线虫分子
8、鉴定中备受青法主要依赖于形态特征和形态测量值,要求鉴定者睐。要有极为丰富的经验和技巧j。基于DNA的分子关于单条线虫DNA微量提取方法有较多的研鉴定方法对鉴定者的要求相对较低,是形态鉴定的究报道。Barstead等和Williams等使用WLB重要辅助手段,目前在线虫的分类鉴定中应用广泛。裂解液成功提取了单条秀丽小杆线虫的DNA。线虫分子鉴定的首要步骤是DNA的提取,包括大量Powers等将根结线虫
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