白及胶对体外培养兔胆管成纤维细胞形态及活性的影响.doc

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1、白及胶对体外培养兔胆管成纤维细胞形态及活性的影响【摘要】目的观察白及胶对成纤维细胞形态及活性的影响。方法分离培养日本大耳白兔胆管成纤维细胞，加入不同浓度白及胶进行共同培养，在光镜下观察日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的改变，用MTT法比色法检测日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性。结果白及胶组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。白及胶组0.K1.0.10.0mg/mL白及胶在作用72h时成纤维细胞活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)o结论白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的影响及白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性的抑制作用，可能是白及胶防治日本大耳白兔

2、腹腔粘连的机制之一。【关键词】成纤维细胞；白及胶；药物作用InfluenceofHyacinthbleti1ladecoctedwateronfibroblasticmorphologyandactivityfromculturerabbitbi1iaryduct[AbstractjObjectiveToobservetheinfluenceofHyacinthbleti1ladecoctedwateronfibroblasticmorphologyandactivity.MethodsFibroblasticcel1swereseparatedfromculturerabbitbi1ia

3、ryduct.ThedifferentconcentrationofHyacintabletiliadecoctedwaterwereaddedandcocultured.Changesoffibroblasticmorphologywereobservedby1ightmicroscope.FibroblasticactivityweredetectedbyMTTcolorimetricmethod.ResultsTnHyacintnbleti1lagroupfibroblasticcel1haresmallsoma,alittlespine.Therewasobviousdiffere

4、nceonfibroblasticactivitybetweencontrolgroupandHyacintnbleti1lagroupat0.1,1.0,10.0mg/mLon72h(P<0.01,P<0.05).ConclusionHyacinthbleti1ladecoctedwaterhaveinhibitioneffectonfibroblasticactivityfromrabbitbi1iaryduct.[KeyWords)Fibroblasticcel1;Hyacinthbleti1la;Drugeffect成纤维细胞(fibroblast,FB)在损伤的修复过程中发挥着重

5、要作用。过度活化的成纤维细胞可导致损伤部位纤维组织增生，是粘连形成的重要因素。目前，尚缺乏有效的药物加以防治。控制FB的生物学特性和增殖功能是预防术后粘连形成的基础和关键。我们应用体外培养的兔胆管成纤维细胞，观察白及胶对成纤维细胞形态及增殖活性的影响，探讨白及胶防治术后腹腔粘连的可能机制。1材料与方法1.1材料日本大耳白兔1只，雄性，体质量3kg,由天津实验动物中心津南区明禾养殖场提供，动物合格证号:07311oMC0-15A型C02培养箱为日本SANYO生产；超净工作台为天津医药净化设备厂生产；TDL-40B离心机为上海科学仪器厂生产；Anthos2010型全自动酶标仪为奥地利生产；WZ

6、S-A微量振荡器为无锡医用器材公司生产;COIC型倒置显微镜由重庆光学仪器厂生产。1.2方法1.2.1白及胶的制备将白及粗粉加适量蒸傩水浸泡过夜，煎煮2次，每次30mino合并煎液，用双层纱布滤过，4000r/min离心15min。除去沉淀，滤液浓缩至每mL相当于生药1g,加95%乙醇，使醇含量达70%,搅匀,静置过夜，滤去乙醇，沉淀水浴挥净乙醇,沉淀加蒸傩水，搅匀（每niL相当于白及生药1g）,得白及胶。1.2.2成纤维细胞的制备[1]日本大耳白兔禁食16h,20%乌拉坦(1g/kg体质量)耳缘静脉注射麻醉，无菌开腹找到胆管，近肠壁端止血钳钳夹损伤胆管1.5cm后关腹。72h后再次无菌手

7、术取胆管2cm,放入含有青霉素及链霉素的0.9%氯化钠注射液中，在净化台中无菌操作剖开胆管，反复冲洗，尽量刮除胆管黏膜层，眼科剪刀剪碎成约1mm3的组织碎块，加入Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEM)营养液放入25mL培养瓶中，瓶底倒置于C02孵育箱中2h,尽量使组织块与培养瓶壁粘附后补足含15%血清DMEM营养液培养细胞，营养液3日换液1次，待成纤维细胞至接近长满培养瓶底后，移除组织